Оценка дефекты обструкции мочевыводящих путей Junction Метиленовый синий краситель инъекции

Общая цель этой процедуры заключается в определении обструкции соединений мочевыводящих путей с помощью инъекции метиленового красителя в почки. Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области развития почек и нижних мочевыводящих путей, такие как соединение мочевого пузыря с уретрой. Основное преимущество этой методики заключается в том, что она обеспечивает простой метод визуализации структуры мочевыводящих путей в худшем случае, что позволяет анализировать развитие мочевыводящих путей.

Для начала эксперимента отмерьте 0,1 грамма порошка метиленового синего. Растворите метиленовый синий в 10 миллилитрах 1x фосфатно-солевого буфера или PBS и перемешайте смесь. Далее отфильтруйте 10 миллиграмм на миллилитр раствор метиленового синего с помощью шприцевого фильтра для устранения засорения во время инъекции.

Затем соберите стерильный набор для кожи головы с трехмиллилитровым одноразовым шприцем и наполните шприц тремя миллилитрами отфильтрованного раствора метиленового синего. Очистите препарирующие ножницы и щипцы 70% этанолом. Для сбора перинатальных эмбрионов в точке Е18.5 или Е19.5 сначала усыпляют беременных мышей с помощью ингаляции углекислого газа.

Затем выполните вывих шейки матки в соответствии с рекомендациями NIH. Далее распылите 70%-ный этанол на брюшную поверхность животного. Затем с помощью стерильных рассекающих ножниц и щипцов вскрывают брюшную полость вентрально.

Приподнимают всю матку и отделяют ее от тела на кончиках маточных рогов. Затем промойте всю матку 1x PBS в чашке Петри. Разрезать матку сегментарно ножницами для рассечения и удалить децидуальную часть плаценты с помощью рассекающих щипцов, чтобы обнажить эмбрионы и желточные мешки.

Сначала удалите желточный мешок, а затем удалите амниотическую оболочку с помощью рассекающих щипцов, чтобы освободить перинатальные эмбрионы. Обезглавьте эмбрион ножницами для препарирования. Прижмите эмбрион вентральной поверхностью вверх к препарирующему микроскопу, оснащенному цифровой камерой для визуализации.

Соберите его хвост для генотипирования. С помощью щипцов аккуратно разорвите кожу, чтобы открыть брюшную полость эмбриона. Затем осторожно удалите лишние органы и ткани, такие как печень, желудок и кишечник, с помощью щипцов, разрезав их или вытащив, чтобы обнажить почки, мочеточники и мочевой пузырь, расположенные дорсально.

Абсорбируйте лишнюю кровь из вскрытого эмбриона с помощью стерильных марлевых салфеток, затем продолжайте вводить краситель. Удалите пузырьки в игле и трубке, выдавливая раствор метиленового синего с кончика иглы под действием гидростатического давления. Поднимите шприц с раствором красителя над уровнем кончика иглы, чтобы начать поток.

А затем опустите шприц, чтобы остановить поток. Затем введите иглу в почечную лоханку рядом с проксимальным отделом мочеточника, стараясь не потревожить его после установки. Выполните инъекцию красителя в почку, чтобы определить ее обструкцию мочевыводящих путей.

После введения одной иглы в почечную лоханку для успешного проведения этого теста игла должна быть введена в почечную лоханку по направлению к мочеточнику, не проходя через почку и не по направлению к кровеносному сосуду. Поднимите шприц вверх примерно на 20 сантиметров, чтобы обеспечить гидростатическое давление, и дайте стечь 15-16 микролитрам раствора красителя. Затем следите за синим цветом красителя, начиная сначала в почечной лоханке, затем по длине мочеточника и, наконец, в просвете мочевого пузыря.

Опустите шприц вниз, чтобы остановить поток красителя и извлечь иглу из почки. Сделайте запись гидронефроза почки, гидромочеточника и конечного положения раствора красителя в лабораторном блокноте. Наконец, выполните инъекцию в контралатеральную почку и дайте красителю течь в течение 20 секунд.

Сделайте снимки почки, мочеточника и мочевого пузыря, прослеженные раствором красителя, с помощью камеры и программы визуализации, подключенной к стереомикроскопу. После инъекции в одну почку метиленовый синий краситель вытекает из почечной лоханки через мочеточник и в мочевой пузырь, в результате чего в мочеточнике и просвете мочевого пузыря появляется видимый синий цвет. Более сильный синий цвет появляется в просвете мочевого пузыря из-за более продолжительного потока около 20 секунд после введения красителя в обе почки, что указывает на отсутствие обструкции мочевыводящих путей во второй мочевыделительной системе.

При введении аномально расширенного гидроуретера конечное положение раствора красителя неясно. Обструкция мочеточникового перехода или UVJO не может быть верифицирована, несмотря на отсутствие красителя в просвете мочевого пузыря, потому что аномальный гидромочеточник был поврежден посередине. При попытке проведения этой процедуры важно помнить о расчете перинатального мешка с красителем, чтобы получить неповрежденную мочевыделительную систему.

И удалите пузырьки, чтобы не перекрыть поступление красителя.