Универсальный протокол для крупномасштабных gRNA библиотека производства из любого источника ДНК

12.4K просмотров

Цитируется: 2

10:32 мин.

6 декабря 2017 г.

10.3791/56264-v

6 декабря 2017 г.

12.4K просмотров
 , 

Методы для создания крупномасштабных gRNA библиотек должна быть простой, эффективной и рентабельной. Мы описываем протокол для производства gRNA библиотек на основе ферментативного пищеварения ДНАО цели. Этот метод, женский (всеобъемлющий gRNA библиотека поколения через контролируемые нуклеиназы деятельности) представляет альтернатива дорогостоящим пользовательских олигонуклеотида синтеза.

Больше видео

Система CRISPR/Cas9

Chapters in this video

0:05

Название

0:48

Расщепление ДНК с помощью MNase и разделение фрагментов ДНК методом ПААГ

3:05

Выделение фрагментов ДНК из ПААГ-гелей и создание линкеров

4:26

Достройка концов очищенных из геля фрагментов и лигирование линкеров

5:32

Отбор по размеру и сборка векторно-вставочного конструкта

6:18

Электропорация электрокомпетентных клеток E. coli штамма TG1

8:38

Результаты: создание библиотеки gRNA из целевой ДНК

9:56

Заключение

Related Videos