Перерезка частичное зрительного нерва у крыс: модель с новой постановляющей части подход к оценке вторичной дегенерации сетчатки ганглия клеток

Вторичная дегенерация ганглиозных клеток сетчатки происходит в основном при глаукоме. В данной статье представлена инновационная модель операционного подхода к частичной пересечению зрительного нерва. Этот компактный оперативный подход улучшает способность исследователя вводить лекарства или носители или селективные индикаторы РГК на культю частично пересеченного зрительного нерва и позволяет исследователям по-новому изучить механизмы вторичного повреждения РГК.

Глаукома является хроническим нейродегенеративным заболеванием, при этом прогрессирующая невропатология сохраняется в течение длительного времени. Глазная гипертензия является одной из явных причин глаукомы, и снижение глазной гипертензии является единственной подтвержденной эффективной терапией для лечения глаукомы. Но состояние некоторых пациентов будет ухудшаться еще больше, даже после того, как глазная гипертензия будет взята под контроль.

Таким образом, считается, что при глаукоме происходит вторичная дегенерация РГК. Тем не менее, механизм, конкретно связанный с первичной или вторичной дегенерацией, до сих пор не ясен. Механизм вторичной дегенерации РГК будет определять лечение нейротравм и нейродегенеративных заболеваний СИС.

Для помощи при частичной количественной пересекции зрительного нерва мы представляем недавно разработанный недорогой хирургический инструмент. Инструмент состоит из двух частей: ручного шеста и рифленой головки. Рифленая головка имеет полукруглую форму с вертикальной глубиной 200 микрометров, а рифленая поверхность позволяет вентральному зрительному нерву проложиться внутри нее и стабилизироваться для пересечения.

Заложите зрительный нерв в паз инструмента. Рифленая поверхность инструмента позволяет стабилизировать зрительный нерв для пересечения. Затем вертикально пересеките зрительный нерв соответствующим кончиком иглы или острием ножа.

Обратите внимание, что отрезается только тыльная часть зрительного нерва, так как вентральная часть защищена инструментом. Отделите и диссоциируйте твердую мозговую оболочку вокруг зрительного нерва, следя за тем, чтобы глазная артерия, связанная с менингеальной оболочкой, не была отрезана. Первичное повреждение было достигнуто в РГК, соответствующих количественно пересеченным аксонам зрительного нерва, дорсальная сторона, в то время как вторичное повреждение было бы выполнено в РГК, соответствующих непересеченным аксонам зрительного нерва, центральной и вентральной стороне, без прямого повреждения.

Крысам проводили анестезию с использованием ветеринарной системы исофурана. Во время операции контролировали анестезию, и дозировка изофлурана была скорректирована соответствующим образом. Постоянно оценивайте глубину и частоту дыхания, а также выполняйте оценку щипцов ног каждые пять минут, чтобы убедиться в отсутствии глубокой боли.

Положите правую сторону крысы вверх на операционный стол головой к операционной. Отрегулируйте правую орбиту в центре хирургического поля зрения. Затем несколько раз очистите область разреза вдоль бокового кантуса до наружного слухового отверстия кожи правой орбиты с нанесением 0,5% хлоргексидина и 75% этанола.

Удалите мех между боковым кантусом к внешнему акустическому отверстию, используя ножницы для ириса. Сделайте надрез кожи, с помощью ножниц радужной оболочки, вдоль бокового кантуса до наружного акустического отверстия длиной от 0,5 до одного сантиметра. Затем зажмите фасцию и потяните вверх, чтобы создать треугольный клин с помощью зубчатых щипцов диаметром 0,12 миллиметра.

Вставьте нижнее лезвие пружинных ножниц Vannas в область разреза и разрежьте фасцию с тем же направлением среза, что и кожа ножниц. Особенно при разрезании подкожной фасции во внешнем боковом кантусе используйте острые зубчатые щипцы, чтобы потянуть вверх подкожную фасцию на поверхности фасции вертикально, и разрежьте фасцию пружинными ножницами Ваннаса, чтобы избежать повреждения орбитальной вены на внешнем кантусе и вызвать сбой модели из-за чрезмерного кровотечения. Разрежьте фасцию ножницами для радужной оболочки глаза, и обнажите орбитальную вену.

Используйте тупое рассечение, чтобы открыть обе стороны разреза. Преимущество этой процедуры заключается в том, что она может предотвратить кровотечение при непосредственном отрезании кровеносных сосудов. Затем с помощью ножниц радужной оболочки разрежьте правый боковой кантус вдоль линии разреза, чтобы полностью обнажить хирургический подход и полностью открыть поле зрения для последующего тупого рассечения орбитальных мышц.

Продолжайте зажимать папку субфасциальной орбитальной мышцы и притупляйте разделение вертикально в направлении разреза кожи и фасции. Затем отделяются по бокам постепенно, достигая орбитальной глубины до появления орбитальной жировой ткани. Эта процедура откроет более глубокие участки орбитальной полости, обеспечивая большее хирургическое окно для работы и обеспечивая беспрепятственный доступ к тканям, которые лежат над зрительным нервом.

При вышеуказанных процедурах, при возникновении кровотечения, надавливайте, используя стерильные хирургические тампоны или ватные тампоны. После обнажения жировой ткани в глазнице измените направление головы крысы с вертикального обращения к хирургу на правую сторону хирурга. Отрежьте орбитальные жировые ткани, покрытые на конусе орбитальной мышцы вокруг зрительного нерва.

Это действие может обеспечить, выявить соответствующий хирургический доступ. Обратите внимание, что объем резецированной жировой ткани должен оставаться в рациональном диапазоне, чтобы избежать продолжительного кровотечения. После разрезания жировой ткани обнажается латеральная прямая мышца.

Зажмите боковую прямую мышцу наружу, а затем разрежьте ее пружинными ножницами Ваннас. Целью этой процедуры является достижение лучшего обнажения зрительного нерва, так как латеральная прямая мышца намного шире и, очевидно, блокирует обзор зрительного нерва. Если под боковой прямой мышцей все еще есть жировая ткань, подтяните жир над зрительным нервом с помощью зубчатых щипцов диаметром 0,12 миллиметра и разрежьте пружинными ножницами Vannas.

Затем видна тканевая оболочка вокруг зрительного нерва. Продолжайте отделять тканевую оболочку по направлению зрительного нерва в глубине орбиты до полного обнажения зрительного нерва. Поддерживайте чистоту области с помощью хирургических тампонов для удаления небольшого количества крови, которая образуется в результате удаления тканей.

Теперь должен быть виден зрительный нерв. Чтобы получить доступ к нерву, удалите менингеальную оболочку, которая окружает нерв, не повреждая глазную артерию. Осторожно поверните тубус, чтобы рассмотреть сосудистый рисунок твердой мозговой оболочки с большим увеличением операционного микроскопа.

Ищите область, лишенную кровеносных сосудов, и допускайте продольный разрез твердой мозговой оболочки. Осторожно разорвите влагалище параллельно направлению зрительного нерва кончиком иглы или острием ножа во избежание повреждения сосудистой сети с боковыми надрезами. Единственным оставшимся покрытием нерва была паутинная оболочка.

Он очень тонкий и прозрачный. Аналогично предыдущему шагу, аккуратно разорвите паутинную оболочку кончиком иглы или острием ножа, параллельно направлению зрительного нерва. Мягко и осторожно поместите зрительный нерв в бороздку инструмента, в результате чего дорсальный зрительный нерв будет немного выше края головки бороздки.

Затем пересеките дорсальный зрительный нерв над платформенным краем головки бороздки кончиком иглы или острием ножа, чтобы завершить частичное пересечение зрительного нерва. Переместите инструмент немного глубже, в вертикальном направлении зрительного нерва, чтобы освободить зрительный нерв. Затем аккуратно выньте головку канавки инструмента.

Старайтесь не царапать глазные мышцы или другие ткани, чтобы избежать дополнительных повреждений. Затем можно наблюдать культю частичного пересечения зрительного нерва. Замените латеральные прямые мышцы, фасции и другие вокруг тканей глаза в исходное положение.

Затем сшить мышечный слой и кожный слой глазницы последовательно. Нанесите на рану мазь с антибиотиком, чтобы предотвратить инфицирование после наложения шва. В процессе реанимации крыс подготовьте теплоизоляцию подогретым ковриком, либо накройте сухой обивкой в клетке.

Укройте их одеялами, чтобы согреться. Обеспечьте проходимость дыхательных путей крыс в процессе восстановления. Животные содержались отдельно и тщательно контролировались после операции.

Для того, чтобы убедиться в успехе создания модели вторичной травмы с новым операционным подходом с использованием самостоятельно разработанного хирургического вспомогательного инструмента, РГК были ретроградно маркированы сразу после создания модели. Целью этой процедуры было ретроградное мечение РГК путем введения нейроиндикаторного красителя в верхний холмик. Краситель будет ретроградно поглощаться РГК в сетчатке и обеспечивает маркер для живых РГК с неперерезанными аксонами в правом глазу.

В то время как РГК, соответствующие аксонам зрительного нерва, которые были частично пересечены в правом глазу, не могли быть помечены фторзолом в качестве контрольного глаза, левый глаз без какой-либо операции, все РГК вдоль зрительного нерва на сетчатке были помечены флуоресцентным золотым красителем ретроградным образом из верхнего холмика. Были показаны результаты флуоресцентно-меченых РГК с частичной транссекцией зрительного нерва или без нее. Флуоресцентным золотом были помечены только РГК в правой сетчатке, соответствующие непересеченной части зрительного нерва, а также визуализирована четкая граница немеченых и меченых РГК, что продемонстрировало частичную транссекцию зрительного нерва.

В качестве контрольного глаза все РГК сетчатки левого глаза были помечены флуоресцентным золотом. Эти изображения показывают, что кровоснабжение правого глаза наблюдалось до и после операции. После операции артерии еще наполнялись кровью, и закупорки вен не наблюдалось.

Это свидетельствовало об отсутствии повреждений системы кровоснабжения во время операции. Успешно создана модель вторичной дегенерации РГК. Модель потенциальной транссекции зрительного нерва является пригодной для изучения животного механизма вторичной дегенерации и скрининга нейропротекторных препаратов в борьбе с вторичной дегенерацией.

Сочетание этой модели заключается в способности точно отделять первичную дегенерацию от вторичной по местоположению, как в зрительном нерве, так и в сетчатке. Основным преимуществом разработанного нами инструмента является более воспроизводимый и более простой в эксплуатации. С практикой все этапы всей хирургической процедуры могут быть выполнены за 10-15 минут для каждого глаза после того, как были сделаны первоначальные входные разрезы.