Assay органоид растворения (ОРА) для функционального анализа кишечных стволовых и ниша клеток

Общей целью анализа восстановления органоидов является функциональный анализ двух основных компонентов ниши кишечных стволовых клеток Lgr5, положительных в клетках Панета, путем их генетической или биохимической модификации с последующей реконструкцией в самообновляющиеся органоиды. Этот метод позволяет решить ключевые специфические вопросы в области кишечных стволовых клеток, такие как генетическая или биохимическая модификация стволовых и нишевых клеток. Основное преимущество этой методики заключается в том, что в отличие от других анализов, в которых используются цельные крипты, в ней используются отсортированные стволовые и нишевые клетки, что позволяет проводить специфический анализ по типу клеток.

Видеодемонстрация этого метода имеет решающее значение, особенно когда речь идет о этапах диссоциации тканей и обработки клеток. Если эти шаги не выполнены должным образом, они приведут к снижению жизнеспособности клеток, особенно после сортировки по фактам. Начните эту процедуру с подготовки материалов и жертвования мыши Lgr5 на фоне C57BL/6J, как описано в текстовом протоколе.