Метод альтернативной культуры для поддержания геномной Hypomethylation мышиных эмбриональных стволовых клеток с использованием MEK ингибитор PD0325901 и витамином С

Общая цель этого протокола заключается в использовании низкомолекулярных соединений PD0325901 и витамина С для поддержания гипометилированного и плюрипотентного состояния в эмбриональных стволовых клетках мышей. Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области культивируемых эмбриональных стволовых клеток мыши FBS, такие как гетерогенность морфологии и дегиперметилирование. Таким образом, основное преимущество этого метода заключается в том, что эмбриональные стволовые клетки мыши способны поддерживать превосходную морфологию и гипометилированное и недифференцированное состояние.

После приготовления планшетов и буферов, согласно текстовому протоколу, предварительно разогрейте мышиные ЭС клетки, питательную среду, трипсин и ПБС на водяной бане при температуре 37 градусов Цельсия. Чтобы пройти через клетки, отсадите среду из чашки и используйте два миллилитра PBS для промывания клеток два раза. Затем снимите PBS и добавьте в клетки 0,3 миллилитра трипсона ЭДТА и быстро наклоните чашку, чтобы покрыть клетки в растворе.