Простой подход к побудить Экспериментальный аутоиммунный неврит мышей C57BL/6 для оценки функциональных и патологического

В настоящем докладе излагается простой подход к успешно побудить экспериментальной аутоиммунных неврит (EAN) с использованием миелиновый белок ноль (P0)_180-199 пептида в сочетании с полного адъюванта Фройнд и коклюша токсин. Мы представляем современные парадигмы способны точно оценить степень функциональной дефицита и невропатологии, которые происходят в этом EAN.

Общая цель этой процедуры заключается в успешном индуцировании экспериментального аутоиммунного неврита или ЭАН в мышиной модели для функционального и патологического анализа патологического процесса. Модель EAN может быть использована для решения ключевых вопросов, связанных с периферической нейропатией. Это также прекрасная модель для потенциального исследования эффективности новых терапевтических агентов.

Основное преимущество этого подхода заключается в том, что он обеспечивает простую и объективную парадигму функционального тестирования, которая может быть применена при использовании модели EAN на мыши. Сегодня вместе со мной эту процедуру демонстрирует Санг Вон Ю, студент бакалавриата в лаборатории биологии нейротрофина и миелина в Мельбурнском университете. За три дня до индукции заболевания включите аппарат для оценки двигательных функций и включите световую кнопку.

Возьмите мышку в руки и опустите ее на емкость с красным пищевым красителем. Поместите мышь в прогулочный отсек и установите скорость беговой дорожки на 15 сантиметров в секунду. Включите беговую дорожку и нажмите кнопку «Запись», чтобы использовать систему визуализации функции ходьбы для фиксации беговых движений мыши в течение 36 секунд.

Через 36 секунд остановите запись и беговую дорожку и сохраните видеофайл тренировочного забега в указанную папку. За день до первой иммунизации с помощью шприца объемом 0,5 миллилитра, оснащенного иглой калибра 30-1/2, введите 1,6 микрограмма на миллилитр коклюшного токсина в 250 микролитрах изотонического PBS IP-мышей мышей, находящихся под наркозом от шести до восьми недель. Затем оцените мышей по клиническим признакам EAN по шкале от нуля до четырех в соответствии с таблицей и выполните оценку двигательной функции, как показано только что на рисунке.

На следующий день соедините равные объемы свежеприготовленных растворов пептида в 0,9%-ном физиологическом растворе и 20 мг на миллилитр микобактерии туберкулеза в полном адъюванте Фрейнда в бусинной бусине и перемешайте растворы на максимальной скорости в течение одной минуты при комнатной температуре. Загрузите инокулюм в шприц, оснащенный иглой 23 калибра, переверните и встряхните шприц перед тем, как выпустить воздух из шахты шприца. Перед введением инокулята удалите волосы сбоку от средней линии между лопатками и продезинфицируйте открытые участки кожи 70% этанолом.

Затем с помощью щипцов Адсона захватите кожу и подайте 50 микролитров раствора мыши, введенной коклюшным токсином, путем подкожной инъекции. На следующее утро введите 1,2 микрограмма на миллилитр коклюшного токсина в 250 микролитрах PBS IP, как только что было продемонстрировано, а затем еще 1,2 микрограмма на миллилитр коклюшного токсина IP через 48 часов. Через три дня после третьей инъекции коклюша введите еще 50 микролитров свежеприготовленного инокулюма в то же место инъекции, что и раньше, и контролируйте клинический результат и двигательную функцию животных два раза в неделю до конца эксперимента.

Пептид-индуцированная пептидами P0 180-199 EAN у мышей C57BL/6 приводит к монофазному заболеванию с клиническим началом через шесть дней после первой иммунизации и максимальной тяжестью через 25 дней после первой иммунизации, с последующим некоторым улучшением клинической оценки через 40 дней после первой иммунизации. Мыши начинают терпеть неудачу в выполнении простой задачи по бегу уже через шесть дней после первой иммунизации, при этом к 35 дню после иммунизации способность бегать на беговой дорожке не улучшается, а через 55 дней после первой иммунизации способность к бегу не улучшается. Исследование полутонких участков седалищных нервов у мышей, индуцированных пептидами EAN, выявило участки демиелинизации по сравнению с седалищными нервами у здоровых людей того же возраста.

Изображения с помощью просвечивающей электронной микроскопии высокой мощности позволяют идентифицировать специфические невропатологические особенности, такие как демиелинизация, повреждение миелиновой пластинки и признаки стресса аксонов, такие как набухание митохондрий. У этих животных также наблюдается острое повреждение аксонов, о чем свидетельствует травматически повышенная экспрессия белка-предшественника бета-амилоида в седалищных нервах, которая не наблюдается в здоровых контрольных тканях соответствующего возраста. Также наблюдается расширение узлов и разрушение параузлов.

После освоения подкожные инъекции могут быть выполнены в течение примерно 5-10 минут для каждой мыши с минимальной вероятностью какой-либо ошибки при инъекции. При попытке выполнить эту процедуру очень важно, чтобы вы наблюдали за местом инъекции, чтобы убедиться, что весь инокулюм остается в месте инъекции и что он не вытекает. Видеосъемка походки на беговой дорожке отлично подходит, потому что она позволяет рассчитать другие параметры, такие как фаза раскачивания или длина шага, и эти показатели могут стать важными при тестировании эффективности новых методов лечения.

После просмотра этого видео у вас должно быть действительно хорошее понимание того, как индуцировать EAN у самцов мышей C57BL/6. Кроме того, у вас должно быть действительно хорошее понимание того, как безопасно и действительно точно делать подкожные инъекции, гарантируя, что не будет ошибок при введении. Не забывайте, что при работе с иглами и инокулюмом, есть вероятность получения травмы, особенно при использовании острых предметов.

Таким образом, чтобы избежать любой вероятности травмы, действительно хорошей идеей будет всегда использовать щипцы и никогда не захватывать кожу или ткань рукой, а также использовать одноразовые шприцы, никогда не закрывая крышку в процессе.