Индукция и микро-КТ мозгового кавернозные мальформации в мышиной модели

Общая цель этой процедуры состоит в том, чтобы вызвать церебральные кавернозные мальформации у неонатальных мышей и измерить бремя заболевания с помощью микрокомпьютерной томографии. Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области церебральных сосудистых заболеваний, таких как церебральные кавернозные мальформации. Основное преимущество этого метода заключается в том, что бремя болезни кавернозной мальформации головного мозга в моделях новорожденных мышей может быть точно и эффективно определено по сравнению с существующими методами.

Визуальная демонстрация этого метода имеет решающее значение, так как индукция кавернозной мальформации головного мозга и этапы анализа микрокомпьютерной томографии сложны для изучения, поскольку это требует опыта и использования сложного программного обеспечения. Начните с растворения 4-HT в 100% этаноле до концентрации 10 миллиграммов на миллилитр. Приготовьте 30 микролитров алаквад, а затем храните при температуре минус 80 градусов по Цельсию.

В день применения разведите алакваду в дозе 4-HT в кукурузном масле до 0,5 миллиграмм на миллилитр. Затем с помощью инсулинового шприца интрогастрально введите 50 микролитров 4-HT новорожденным детенышам P1, чтобы вызвать экспериментальные поражения CCM. Начните подготовку образца с наполнения шприца объемом 10 миллилитров, оснащенного иглой 29 калибра, тремя миллилитрами 2%-ного параформальдегида и PBS.

Затем проведите внутрисердечную продукцию эвтенизированного щенка Р8, введя иглу в желудочек мышиного сердца и медленно вводя полный объем параформальдегида. После того, как вы с помощью ножниц отделите голову, удалите кожу с головы и отклейте череп с помощью щипцов, чтобы рассечь весь мозг на 4% параформальдегида и PBS. После фиксации мозга на ночь при температуре 4-HT градусов по Цельсию.

На следующий день отделите задние мозги с помощью щипцов и промойте раствором PBS. Затем инкубируйте задний мозг в растворе йода Люголя в течение 48 часов. После инкубации кратковременно высушите задний мозг на воздухе, чтобы удалить избыток раствора йода Люголя.

Затем упакуйте окрашенные йодом задние мозги Люголя в микроцентрифужные пробирки объемом 0,65 микролитра и полностью запечатайте пластиковой парафиновой пленкой, чтобы избежать усадки тканей. Поместите микроцентрифужные пробирки в пятимиллилитровые пластиковые пробирки с губками, чтобы они не двигались во время сканирования. Вертикально установите трубку, содержащую задний мозг, на алюминиевый держатель в системе микро-КТ.

Задайте параметры сканирования. Используйте 540 проекций и двухсекундное время экспозиции при источнике 50 киловольт и 10 ватт для получения томографических наборов данных. Радиограммы сканирования автоматически восстанавливаются с помощью аппаратного программного обеспечения для реконструкции проекции, поставляемого системой микро-компьютерной томографии, создавая серию изображений из 16-битных осевых срезов.

Микрокомпьютерная томография с контрастом йода Люголя в достаточной степени выявляла поражения КМК. Отсканированные рентгеновские изображения были реконструированы для получения 3D-изображений мозга мыши, что позволило визуализировать целые поражения в паренхиме мозга на разной глубине и ориентации, а также оценить структуру в 3D-расположении поражений в мозге. В этой таблице приведен пример количественного вывода помеченных отдельных поражений.

После своего развития этот метод проложил путь исследователям в области сосудистых заболеваний к изучению механизма и терапевтических возможностей для лечения церебральных кавернозных мальформаций на мышиных моделях. После просмотра этого видео у вас должно быть хорошее понимание того, как индуцировать поражение КМК на мышиных моделях, а также как получить и проанализировать нагрузку поражения КМК с помощью метода микро-КТ.