5 января 2018 г.
Этот протокол описывает использование модифицированных t-лабиринту для оценки функциональных обучения и памяти в асфиксии сердца индуцированной ишемии головного мозга.
Общая цель этого модифицированного Т-образного лабиринта заключается в оценке функционального обучения и памяти после ишемии головного мозга, вызванной остановкой сердца. Эти модифицированные товарищи по команде могут помочь восстановить функцию гиппокампа при заболеваниях, вызывающих дефицит кратковременной памяти, таких как остановка сердца. Основным преимуществом модифицированного Т-образного лабиринта является его относительно простая конструкция.
Этого достаточно, чтобы измерить функциональную память на обучение после ишемии. Кроме того, анализ данных прост и понятен. Поскольку асфиксическая остановка сердца в основном приводит к дефициту кратковременной памяти, модифицированный Т-лабиринт также может быть применен при других заболеваниях центральной нервной системы, которые вызывают дефицит кратковременной памяти.
Такие как болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона и транзиторная ишемическая атака. После катетеризации бедренной, артериальной и венозной катетеризации при необходимости отрегулируйте физиологические параметры, модулируя ударный объем, уровень кислорода или закиси азота. Затем с помощью одномиллилитрового шприца, соединенного с адаптером приманки 23 калибра, введите бромид векурония через бедренную вену и подождите две минуты.
Убедитесь, что кровяное давление находится на уровне или около 100 миллиметров ртутного столба. Вызвать апноэ в течение шести минут, отсоединив эндотрахеальную трубку от аппарата искусственной вентиляции легких. Далее закупорьте эндотрахеальную трубку одномиллилитровым шприцем, чтобы обеспечить полное апноэ.
В последнюю минуту апноэ отрегулируйте частоту дыхания аппарата ИВЛ до 80 вдохов в минуту и увеличьте подачу кислорода до двух литров в минуту с нулевым процентом закиси азота, чтобы выдуть остатки изофлурана или закиси азота, оставшиеся в аппарате ИВЛ. После шести минут апноэ извлеките один миллилитр шприца из эндотрахеальной трубки. Снова подключите эндотрахеальную трубку к аппарату искусственной вентиляции легких.
Затем используйте одномиллилитровый шприц, соединенный с адаптером приманки 23 калибра, для введения адреналина через бедренную вену. Проводите ручные компрессии грудной клетки большим, указательным и средним пальцами на грудной клетке животного легкими круговыми движениями по осям X и Z до восстановления спонтанного кровообращения. Затем используйте еще один миллилитровый шприц, соединенный с адаптером для приманки 23 калибра, для введения бикарбоната натрия через бедренную вену, сразу после возвращения к спонтанному кровообращению, чтобы облегчить респираторный ацидоз.
Через 10 минут после реанимации снова измерьте газы крови, чтобы определить кислотно-щелочной статус. Используйте кровоостанавливающее средство для пережатия бедренной артерии и вены. Медленно и аккуратно удалите артериальные и венозные катетеры с помощью тупых щипцов.
Затем переложите бедренную артерию и вену шелковым швом 5 О, чтобы предотвратить кровотечение. Закройте кожу, лежащую над местом операции, шелковым швом 3 O с использованием техники прерывистого наложения швов, чтобы свести к минимуму вероятность повторного открытия раны. После того, как крыса начнет дышать самостоятельно, через 30-60 минут после реанимации отключитесь от аппарата искусственной вентиляции легких и аккуратно удалите эндотрахеальную трубку.
Поместите крысу в детский инкубатор на ночь. Наконец, переведите крысу в индивидуальную клетку и верните крысу в помещение для животных с обычным кормом и водой. За день до операции держите каждую крысу в руках в течение пяти минут и никогда не поднимайте крысу из клетки во время работы.
Затем осторожно возьмите его за хвост одной рукой, в то время как другая рука поддерживает его ноги, и дайте ему пять раз перепрыгнуть с руки на клетку. Разделите каждую крысу на отдельные клетки, чтобы они не доминировали за еду или дрались. Затем через три дня после фиктивной операции или операции ВДА переведите крысу с клеткой в тихую и темную комнату до начала первого прогона.
Включайте только маломощную настольную лампу и размещайте ее в углу испытательной комнаты, чтобы поддерживать минимальное освещение. Дайте крысе адаптироваться к темноте в течение 10 минут. Далее расстелите тонкий слой подстилки, чтобы покрыть весь пол лабиринта и поместите крысу на стартовую руку.
Дайте каждой крысе три минуты, чтобы исследовать правую или левую руку ворот. После того, как крыса возьмет на себя обязательства по руке ворот, когда все четыре лапы крысы войдут в руку ворот, заблокируйте Т-образное соединение между стартовой рукой и рукой противоположной цели, чтобы предотвратить попадание крысы в руку противоположной цели. Оставьте крысу в лабиринте на 30 секунд.
Затем возьмите крысу и поместите ее обратно в клетку примерно на 30 секунд. Затем снимите Т-образный распределительный блок с Т-образного лабиринта. Снова поместите крысу на стартовую руку и повторите тест, чтобы определить спонтанное чередование.
Пусть крысы выполняют четыре пробежки в день с 10-минутным перерывом после первых двух пробежек. Наконец, меняйте подстилку во время 10-минутного перерыва и между животными, чтобы устранить смещение запаха. Очистите Т-образный лабиринт 75% этанолом, а затем дистиллированной водой в конце каждого экспериментального дня.
Результаты теста на спонтанное чередование показывают, что частота чередования в течение трех дней подряд в группе ACA была значительно ниже по сравнению с контрольной группой. Это связано с тем, что у крыс, подвергшихся воздействию ACA, развилось увеличение предпочтения в боковых лучах по сравнению с контрольной группой. После просмотра этого видео у вас должно быть хорошее понимание того, как использовать этот модифицированный Т-образный лабиринт для оценки дефицита кратковременной памяти после ишемии головного мозга у грызунов.
Пытаясь пройти этот модифицированный Т-образный лабиринт, важно осторожно блокировать противоположную руку после того, как крыса войдет в одну из рук ворот. Кроме того, Т-образный лабиринт должен выполняться в темном помещении с минимальным освещением, что снижает беспокойство крыс.
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео
В данном протоколе описывается использование модифицированного Т-образного лабиринта для оценки функционального обучения и памяти после церебральной ишемии, вызванной остановкой сердца. Конструкция модифицированного Т-образного лабиринта проста, но эффективна для измерения дефицита памяти, связанного с ишемией.
Оценка дефицита краткосрочной памяти в доклинических моделях остановки сердца способствует валидации мишеней для нейропротекторной терапии. Модифицированный T-образный лабиринт представляет собой воспроизводимый метод с низким уровнем стресса для измерения рабочей памяти, зависящей от гиппокампа, что позволяет снизить механистические риски на ранних этапах поиска. Данный подход повышает прогностическую достоверность при оценке соединений для когнитивного восстановления после ишемии.
Модифицированный Т-образный лабиринт вписывается в континуум разработки лекарственных средств — от валидации мишени до оптимизации ведущего соединения, особенно в программах по изучению ЦНС, направленных на терапию ишемических или нейродегенеративных заболеваний.