Стеноз нижней полой вены: модель мышиных тромбоза глубоких вен

Общая цель этой хирургической процедуры заключается в создании стеноза нижней полой вены для имитации искажения кровотока для инициирования тромбоза глубоких вен. Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области венозного тромбоза о механизмах инициации тромбоза глубоких вен. Основное преимущество этой методики заключается в том, что она имитирует нарушение кровотока, что является ключевым механизмом инициации тромбоза в венах.

Визуальная демонстрация этого метода имеет решающее значение, так как отделение нижней полой вены от аорты и создание отверстия между этими тканями трудно объяснить вербально. Начните с бритья живота мыши, находящейся под наркозом в возрасте от 8 до 12 недель, весом от 19 до 25 граммов и поместите мышь в положение лежа на грелке. Стерильной ватной палочкой трижды продезинфицируйте открытые участки кожи антибактериальным раствором.

Подтвердите соответствующий уровень седации отсутствием реакции на защемление пальца ноги и накройте мышь стерильной простыней с отверстием над операционным местом. Под препарирующим микроскопом сделайте разрез по средней линии живота, начиная на 1,5 сантиметра ниже грудины, и с помощью ватных палочек выведите кишечник наружу к левой стороне животного. Накройте ткани кишечника стерильной марлей, смоченной в 37 градусах Цельсия солевого раствора.

Поместите тканевые ретракторы, чтобы расширить разрез и локализовать нижнюю полую вену, или IVC, и ее боковые ветви, каудально относящиеся к левой почечной вене. С помощью щипцов подтяните жировую ткань, окружающую боковые ветви, затем с помощью второго щипца проложите туннель под веткой. И перевязать все боковые ветви как можно ближе к НПВ инертными проленовыми швами 7-0.

Удерживая окружающие ткани щипцами, потяните НПВ вверх и влево, чтобы создать напряжение на небольшом участке между НПВ и аортой, а именно между НПВ и левой почечной веной. Вставьте вторую пару щипцов между аортой и IVC и открывайте и закрывайте щипцы не более трех-пяти раз, чтобы сделать отверстие. Очень важно сделать отверстие точно в том месте, где НПВ сходится с левой почечной веной.

Левой рукой поместите двухсантиметровый кусок инертного проленового шва 7-0 в левую сторону брюшинной полости, близко к IVC, и потяните IVC вверх и снова влево. Вставьте вторые щипцы в отверстие между аортой и НПВ так, чтобы кончики оказались с другой стороны НПВ и протяните шов обратно через отверстие. Завяжите свободный временный узел и поместите в узел проставку для иглы 30 калибра, согнутую в крючок.

Затянув узел, снимите спейсер и с помощью ватной палочки верните кишечник в брюшную полость. С помощью непрерывных петель закройте брюшину швом 6-0 VICRYL и закройте кожу металлическими скобами. Подкожно вводите мышке 0,5 миллилитра глюкозалина 37 градусов Цельсия.

Затем поместите мышь в индивидуальную клетку в камеру с температурой 25 градусов Цельсия, содержащую пищу и гелевую воду, с контролем до полного выздоровления. Индукция стеноза в НПВ инициирует искажение и застой кровотока, что приводит к развитию тромба, который структурно похож на тромбы глубоких вен, наблюдаемые у человека, и которые легко визуализируются макроскопически. Кроме того, в этой модели стеноза НПВ в плазме наблюдается повышенный уровень D-димера, являющегося продуктом деградации фибрина, что указывает на наличие активного тромботического процесса, аналогичного тому, который наблюдается у человека.

Несмотря на то, что большинство экспериментальных животных производили тромбы в этой модели, одним из основных недостатков является изменчивость размера тромбов, наблюдаемая у разных животных. После освоения этой техники ее можно выполнить за 15 минут, если она выполнена правильно. После своего развития этот метод проложил путь исследователям в области венозного тромбоза к изучению механизмов ТГВ на мышиной модели.