С помощью ТРИФОСФАТЫ/Cas9 гена, редактирования для изучения онкогенных активность мутантов Calreticulin в зависимых Cytokine гемопоэтических клеток

12.5K просмотров

Цитируется: 6

10:21 мин.

5 января 2018 г.

10.3791/56726-v

5 января 2018 г.

12.5K просмотров

Nouran S. Abdelfattah¹ , Ann Mullally¹^,²^,³

¹Division of Hematology, Department of Medicine, Brigham and Women's Hospital, Harvard Medical School, ²Broad Institute, ³Dana-Farber Cancer Institute, Harvard Medical School

Целевых генов редактирования с помощью ТРИФОСФАТЫ/Cas9 значительно облегчило понимание биологических функций генов. Здесь мы используем методологию ТРИФОСФАТЫ/Cas9 модель calreticulin мутации в cytokine зависимых гемопоэтических клеток с целью изучения их онкогенного действия.

Больше видео

Мутации кальретикулина

анализ трансформации клеток Ba/F3

дизайн единичных гидовых РНК

конструирование лентивирусного вектора

негомологичное соединение концов

анализ методом проточной цитометрии

анализ жизнеспособности клеток

мышиный интерлейкин 3

Chapters in this video

0:05

Название

0:44

Клонирование олигонуклеотидов sgRNA

1:08

Рестрикция вектора LentiGuide-puro

2:04

Лигирование отжженных олигонуклеотидов в рестригированный остов

3:02

Создание клеточных линий со стабильной экспрессией spCas9

5:40

Репортерный анализ активности Cas9

6:10

Спинфекция sgRNA в клетки, экспрессирующие Cas9

6:31

Клеточная трансформация Ba/F3 и положительный отбор путем удаления m-IL3

7:23

Результаты: использование инструмента CRISPR/Cas9 и клеточной трансформации Ba/F3 для изучения онкогенного потенциала мутированного кальретикулина

9:02

Заключение