ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Автор благодарит профессор ю. Озаки (Kwansei Гакуин университет) и д-р T. Ито (национального института передовых промышленных наук и технологий) за их плодотворное обсуждение этой работы. Эта работа была поддержана KAKENHI (целевые субсидии для научных исследований C) от министерства образования, культуры, спорта, науки и технологии (№ 16K 05671).

1. Пробоподготовка
<ol><li>
Подготовка коллоидных наночастиц серебра 20<ol>
<li>Для изготовления коллоидных наночастиц серебра, Растворите 0.030 g нитрата серебра и 0.030 g тринатрия цитрат дигидрат в 150 мл воды в колбу 200 мл круглым дном.</li>
		<li>Совместить колбу с Дефлегматоры (Dimroth).</li>
		<li>Перемешайте раствор в колбу с баром магнитной мешалкой и перемешать. Затем тепло перемешивания раствора в колбу в масляной ванне при 150 ° C для 60 мин. Примечание: Решение повернет желтый, затем молочно-серый.</li>
		<li>Cool подвеска при комнатной температуре и держать подвеска в колбе, покрытые алюминиевой фольги в холодильник. Примечание: Протокол может быть приостановлена на данный момент. Используйте наночастицы коллоидных, после хранения в холодильнике, в течение одного месяца.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Подготовка образца для разноцветные мигающие выбросов 11<ol>
<li>Готовые микроскопа, вручную мыть стеклянной пластины с мылом и промыть водой.</li>
		<li>Добавить 0,1% водный раствор поли L-лизин в стеклянной пластине и удалить решение с вентилятором.</li>
		<li>Добавить Серебро коллоидное подвеска в стеклянной пластине и удалите подвеска с вентилятором.</li>
		<li>Заключите область на стеклянную пластину с жидким блокатор ручкой.</li>
		<li>Падение дистиллированной воды на стеклянной пластине и покрыть ее с другой стеклянной пластины для создания микроскопа и предотвратить испарение воды.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Подготовка образца для монотонный цветные мигающий SERS 7 , 8 , 9 , 10<ol>
<li>Готовые микроскопа, вручную мыть стеклянной пластины с мылом и промыть водой.</li>
		<li>Смешать Серебро коллоидное подвеска с thiacyanine или thiacarbocyanine краситель (25 или 4 мкм, соответственно) и водный раствор NaCl (10 мм) в том соотношении 2:1:1.</li>
		<li>Удалить образец подвеска на стеклянную пластину и удалите подвеска с вентилятором.</li>
		<li>Заключите область на стеклянную пластину с жидким блокатор ручкой.</li>
		<li>Падение водный раствор NaCl (1 М) на стеклянную пластину для иммобилизации наночастиц серебра и покрыть ее с другой стеклянной пластины для создания слайд плита микроскопа и предотвратить решение от испарения.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. наблюдение за мигает наночастиц серебра
<ol><li>
Освещение образца
	<ol>
<li>Поместите образец стеклянной пластины, подготовлен с использованием протокола 1.2 или 1.3 на сцене инвертированным микроскопом.</li>
		<li>Освещения стеклянной пластины образца, используя белый свет через конденсор темного поля и сосредоточиться на различные цветные пятна (синий, зеленый, желтый и красный) на стеклянной пластине с помощью объектива (60 X).</li>
		<li>Осветить образца стеклянной пластины с помощью аттенуированные луча, поставлены под углом 30° по отношению к поверхности образца, от диодный лазер накачкой твердого (СППЗ) непрерывном (cw) через фильтр помех.</li>
		<li>Чтобы использовать лазерной подсветки для наблюдать Серебряный nanoaggregates как монотонный цветные пятна в одноцветных окружающих, переместить области освещения лазерный центр мнение и сосредоточиться на пятна на стеклянной пластине, регулируя сцену в z направлении.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Наблюдение за мигает
	<ol>
<li>Вставьте фильтр Лонг перевал после объектива и освещать образца стеклянной пластины с помощью DPSS cw лазерный луч, поставлены под углом 30° по отношению к поверхности образца через фильтр помех.</li>
		<li>Найти, мигающие пятна, как показано на рисунке 1 (см. также Рисунок S1 в дополнительном материале), перемещая сцене в x - и y направления.</li>
		<li>Запись видео мигающий пятен с инвертированным микроскопом, в сочетании с охлаждением цифровой зарядовой (связью ПЗС) камеры, который имеет разрешение время 61-120 мс, за 20 мин.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. анализ мигает SERS
<ol><li>
Дифференцирование время профиля из видео
	<ol>
<li>В программное обеспечение, которое управляет камеры на ПЗС откройте видео файл.</li>
		<li>Чтобы выбрать мигающий пятна и темные области, перетащите областей, которые отдельно охватывают регионы с и без пятен на видеоизображении.</li>
		<li>Для получения сигнала интенсивности время профили от мигающий пятна и темных областей в видео, выберите Временной анализ в анализеи нажмите кнопку Calculate в окне Временной анализ .</li>
		<li>Сохраните данные в текстовый файл.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Анализ времени профиля
	<ol>
<li>Выровнять базовый профиль времени путем вычитания время профиль из темной области и/или установку с полиномиальной функцией, как показано в цифры 2A и 2B.</li>
		<li>Оцените усредненной базовых интенсивности, который состоит из примерно 2000 очков, ябазыи стандартное отклонение базовой интенсивностей, σ, как показано в цифры 2 c и 2D.</li>
		<li>Отличают яркие события от темных событий с помощью большей интенсивности порога ябазовый + 3σ и записи длительности выполнения каждого события. На рисунке 3, например, записать событие от 0 до 3.5476 s как темное событие (с продолжительностью t = 3.5476 s) и записать событие от 3.5476 до 4.0981 s как яркое событие (с продолжительностью t = 0.5505 s). Повторите процедуру, как показано в таблице 1.</li>
		<li>Подсчитать количество ярких и темных событий для каждого срока, как выражено в первой и второй строках Таблицы2.</li>
		<li>Сумма за каждый срок, за исключением событий, короче, чем продолжительность tколичество событий. Выраженное в второй и третьей строках таблицы 2, например, сумма количество событий для каждого продолжительности (за исключением события для t = 0.0612 s) как 41 + 18 + 9 +...; результат равен суммирования для t = 0.1223 s, т.е. 103.</li>
		<li>Разделите суммированием каждый длительность и выполняет их нормализацию. Как указано в таблице 2, например, разделить суммирования для длительности t = 0.0612 s, s продолжительность 0.0612. В результате получается 3,351.5791. Затем разделите результат на общее число результатов в четвертой строке в таблице 2. Распределение вероятностей является производным быть 0.64494.</li>
		<li>Участок распределения вероятностей для ярких событий Pна(t) против их продолжительность t в графе логарифм логарифм и журнал10Pна(t) журнал10 (<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/56729/56729eq1.jpg">) вывести власть закона экспоненты αна для конкретного мигает пятно. Если Pна(t) <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/56729/56729eq1.jpg"> , линии установлены отклоняется от участков при малых значениях Pна(t), как показано пунктирной линией на рисунке 4A.</li>
		<li>Участок распределения вероятностей для темных событий Poff(t) против их продолжительность t в графе логарифм логарифм и установите Log10Poff(t), (10) журнала <img alt="Equation 3" src="/files/ftp_upload/56729/56729eq3.jpg"> вывести власть закона экспоненты αпокинуть и усечения время τ от же мигает пятно. Если Poff(t) <img alt="Equation 3" src="/files/ftp_upload/56729/56729eq3.jpg"> , гладкой кривой отклоняется от участков при малых значениях Poff(t).</li>
		<li>Повторите 3.2.1 для 3.2.8 для других мигающий пятна в видео.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Qian, X. M., Nie, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-molecule+and+single-nanoparticle+SERS%3A+from+fundamental+mechanisms+to+biomedical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Soc.+Rev%22%5BJournal%5D)">Single-molecule and single-nanoparticle SERS: from fundamental mechanisms to biomedical applications.</a> Chem. Soc. Rev. 37, 912-920 (2008).</li>
<li>Pieczonka, N. P. W., Aroca, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+molecule+analysis+by+surfaced-enhanced+Raman+scattering%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Soc.+Rev%22%5BJournal%5D)">Single molecule analysis by surfaced-enhanced Raman scattering.</a> Chem. Soc. Rev. 37, 946-954 (2008).</li>
<li>Kneipp, J., Kneipp, H., Kneipp, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SERS+-a+single-molecule+and+nanoscale+tool+for+bioanalytics%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Soc.+Rev%22%5BJournal%5D)">SERS -a single-molecule and nanoscale tool for bioanalytics.</a> Chem. Soc. Rev. 37, 1052-1060 (2008).</li>
<li>Kitahama, Y., Ozaki, Y. Analysis of blinking SERS by a power law with an exponential function. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKitahama%2C+Y+%22Frontiers+of+Surface-Enhanced+Raman+Scattering%3A+Single-Nanoparticles+and+Single+Cells%22">Frontiers of Surface-Enhanced Raman Scattering: Single-Nanoparticles and Single Cells</a>. , Wiley. Chichester. Chapter 6 (2014).</li>
<li>Kitahama, Y. Truncated Power Law Analysis of Blinking SERS. <a target="_blank" href="http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/bk-2016-1245.ot001">Frontiers of Plasmon Enhanced Spectroscopy Volume 1 (ACS Symposium series Vol. 1245)</a>. , American Chemical Society. Washington DC. Chapter 4 (2016).</li>
<li>Bizzarri, A. R., Cannistraro, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((L%C3%A9vy+Statistics+of+Vibrational+Mode+Fluctuations+of+Single+Molecules+from+Surface-Enhanced+Raman+Scattering%5BTitle%5D)+AND+%22Phys.+Rev.+Lett%22%5BJournal%5D)">Lévy Statistics of Vibrational Mode Fluctuations of Single Molecules from Surface-Enhanced Raman Scattering.</a> Phys. Rev. Lett. 94, 068303(2005).</li>
<li>Kitahama, Y., Tanaka, Y., Itoh, T., Ozaki, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Power-law+analysis+of+surface-plasmon-enhanced+electromagnetic+field+dependence+of+blinking+SERS+of+thiacyanine+or+thiacarbocyanine+adsorbed+on+single+silver+nanoaggregates%5BTitle%5D)+AND+%22Phys.+Chem.+Chem.+Phys%22%5BJournal%5D)">Power-law analysis of surface-plasmon-enhanced electromagnetic field dependence of blinking SERS of thiacyanine or thiacarbocyanine adsorbed on single silver nanoaggregates.</a> Phys. Chem. Chem. Phys. 13, 7439-7448 (2011).</li>
<li>Kitahama, Y., Tanaka, Y., Itoh, T., Ozaki, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+excitation+laser+intensity+dependence+of+blinking+SERRS+of+thiacarbocyanine+adsorbed+on+single+silver+nanoaggregates+by+using+a+power+law+with+an+exponential+function%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Commun%22%5BJournal%5D)">Analysis of excitation laser intensity dependence of blinking SERRS of thiacarbocyanine adsorbed on single silver nanoaggregates by using a power law with an exponential function.</a> Chem. Commun. 47, 3888-3890 (2011).</li>
<li>Kitahama, Y., Enogaki, A., Tanaka, Y., Itoh, T., Ozaki, Y. <a target="_blank" href="http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/jp312530j">Truncated power law analysis of blinking SERS of thiacyanine molecules adsorbed on single silver nanoaggregates by excitation at various wavelengths.</a> J. Phys. Chem. C. 117, 9397-9403 (2013).</li>
<li>Kitahama, Y., Araki, D., Yamamoto, Y. S., Itoh, T., Ozaki, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Different+behaviour+of+molecules+in+dark+SERS+state+on+colloidal+Ag+nanoparticles+estimated+by+truncated+power+law+analysis+of+blinking+SERS%5BTitle%5D)+AND+%22Phys.+Chem.+Chem.+Phys%22%5BJournal%5D)">Different behaviour of molecules in dark SERS state on colloidal Ag nanoparticles estimated by truncated power law analysis of blinking SERS.</a> Phys. Chem. Chem. Phys. 17, 21204-21210 (2015).</li>
<li>Kitahama, Y., Nagahiro, T., Tanaka, Y., Itoh, T., Ozaki, Y. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/jrs.5079/abstract">Analysis of blinking from multicoloured SERS-active Ag colloidal nanoaggregates with poly-L-lysine via truncated power law.</a> J. Raman. Spectrosc. 48, 570-577 (2017).</li>
<li>Habuchi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-Molecule+Surface+Enhanced+Resonance+Raman+Spectroscopy+of+the+Enhanced+Green+Fluorescent+Protein%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">Single-Molecule Surface Enhanced Resonance Raman Spectroscopy of the Enhanced Green Fluorescent Protein.</a> J. Am. Chem. Soc. 125, 8446-8447 (2003).</li>
<li>Weiss, A., Haran, G. <a target="_blank" href="http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/jp0126863">Time-Dependent Single-Molecule Raman Scattering as a Probe of Surface Dynamics.</a> J. Phys. Chem. B. 105, 12348-12354 (2001).</li>
<li>Emory, S. R., Jensen, R. A., Wenda, T., Han, M., Nie, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Re-examining+the+origins+of+spectral+blinking+in+single-molecule+and+single-nanoparticle+SERS%5BTitle%5D)+AND+%22Faraday+Discuss%22%5BJournal%5D)">Re-examining the origins of spectral blinking in single-molecule and single-nanoparticle SERS.</a> Faraday Discuss. 132, 249-259 (2006).</li>
<li>Itoh, T., Iga, M., Tamaru, H., Yoshida, K., Biju, V., Ishikawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+evaluation+of+blinking+in+surface+enhanced+resonance+Raman+scattering+and+fluorescence+by+electromagnetic+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chem.+Phys%22%5BJournal%5D)">Quantitative evaluation of blinking in surface enhanced resonance Raman scattering and fluorescence by electromagnetic mechanism.</a> J. Chem. Phys. 136, 024703(2012).</li>
<li>Willets, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Super-resolution+imaging+of+SERS+hot+spots%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Soc.+Rev%22%5BJournal%5D)">Super-resolution imaging of SERS hot spots.</a> Chem. Soc. Rev. 43, 3854-3864 (2014).</li>
<li>Dieringer, J. A., Lettan, R. B., Scheidt, K. A., Van Duyne, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Frequency+Domain+Existence+Proof+of+Single-Molecule+Surface-Enhanced+Raman+Spectroscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">A Frequency Domain Existence Proof of Single-Molecule Surface-Enhanced Raman Spectroscopy.</a> J. Am. Chem. Soc. 129, 16249-16256 (2007).</li>
<li>Cichos, F., von Borczyskowski, C., Orrit, M. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1359029407000726">Power-law intermittency of single emitters.</a> Curr. Opin. Colloid Interface Sci. 12, 272-284 (2007).</li>
<li>Tang, J., Marcus, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+fluorescence+blinking+in+semiconductor+nanocrystal+quantum+dots%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chem.+Phys%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of fluorescence blinking in semiconductor nanocrystal quantum dots.</a> J. Chem. Phys. 123, 054704(2005).</li>
<li>Lee, P. C., Meisel, D. <a target="_blank" href="http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/j100214a025?src=recsys">Adsorption and surface-enhanced Raman of dyes on silver and gold sols.</a> J. Phys. Chem. 86, 3391-3395 (1982).</li>
<li>Krichevsky, O., Bonnet, G. <a target="_blank" href="http://iopscience.iop.org/article/10.1088/0034-4885/65/2/203/meta">Fluorescence correlation spectroscopy: the technique and its applications.</a> Rep. Prog. Phys. 65, 251-297 (2002).</li>
<li>Hess, S. T., Huang, S., Heikal, A. A., Webb, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+and+Chemical+Applications+of+Fluorescence+Correlation+Spectroscopy%3A+A+Review%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Biological and Chemical Applications of Fluorescence Correlation Spectroscopy: A Review.</a> Biochemistry. 41, 697-705 (2002).</li>
</ol>

Автор не имеет ничего, чтобы раскрыть.

От перекрестка Серебряный nanoaggregate выдается SERS. Таким образом нам нужно подготовить nanoaggregates, вместо того, чтобы коллоидных наночастицы, которые покрыты цитрат анионов. Серебряный агрегатов образуются из солить, эффект, созданный путем добавления поли L-лизин, которая -NH-3+ и происхождение SERS, или катионы Na+ от NaCl, как показано на Рисунке С2 дополнительного материала. Кроме того чтобы осветить многие места в широкой области, несфокусированного лазерный ...

Поверхность расширение комбинационного рассеяния (Серов) является высокочувствительным Рамановская спектроскопия от поверхности благородного металла. Так как спектр Раман предоставляет подробные сведения о молекулярной структуры, основанной на острый пик позиции, через колебательных режимах функциональных групп в молекулах, могут расследоваться информации одной молекулы на поверхности металла с помощью SERS1,2,3. Из серебра nanoaggregate с на уровне одной молекулы адсорбата мигающий сигнал наблюдается1,2,3,4,5,6, 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13 , 14 , 15 , 16и спектр колеблется1,2,3,4,5,6,,78, 9,10,11,12,,1314. Мигание может быть вызвана одной молекулы, что случайно перемещается из расширенной электромагнитное поле (EM) на стыке нанометрового размера серебра nanoaggregate. Поэтому мигает считается простые доказательства для обнаружения одной молекулы, по сравнению с техникой с использованием распределения Пуассона SERS интенсивности и3,Би аналита в2,17. Однако подробные механизмы мигающий и колебания спектра, который может сильно зависеть от молекулярных поведение на поверхности Ag, остается спорным.
В предыдущих исследованиях мигает SERS был проанализирован с помощью автокорреляционной функции, которые можно рассчитать коэффициент диффузии и концентрация молекул, движущихся из расширенной ЭМ поля12,13,14 . Кроме того Оценка нормированное стандартное отклонение, которое представляет нестабильность в общей интенсивности, почерпнута из профиля время сигнала15. Однако эти аналитические подходы могут основываться на поведение нескольких молекул. Напротив в супер-резолюции изображений мигает SERS, сингл молекула поведение в расширенной ЭМ поля может быть определены16. Однако эти методы могут получить такие параметры только в расширенной ЭМ поля. Случайное поведение одной молекулы в широком диапазоне (например, в мигающий SERS) может быть представлено как власть закона, вместо того, чтобы средний4,5,6,7,8 ,9,10,11, похожими на мигающий флуоресценции из одного полупроводниковых квантовых точка (QD)18,19. Используя власть закона анализа4,5,6,7,8,9,10,11, молекулярные поведение может быть оценена в яркие государства (в расширенной области EM) и темное состояние10; то есть можно оценить поведение молекулы на всей поверхности серебра.
Для этой техники, коллоидное серебро nanoaggregates являются используемые в4,5,6,,78,9,10,11. Эти nanoaggregates показывают различные локализованные поверхностного плазмон резонанс (ЛСПР) полос, которые сильно влияют на расширение электромагнитных полей, когда они рады на определенных длин волн. Таким образом можно сразу получить SERS-активные серебряные наночастицы существуют в коллоидной суспензии и некоторые данные. В случае простой наноструктур, которые имеют конкретные размеры, формы и механизмы, ЛСПР зависимость SERS мигает можно скрыть другие зависимости7; а именно если используется хорошо или плохо наноструктур для ЛСПР, параметры будет постоянным, и поэтому другие зависимости будут скрыты. Анализ питания закон был использован для обнаружения различных зависимостей мигающий SERS Серебро коллоидное nanoaggregates4,5,6,,78, 9 , 10 , 11.

<table><tbody><tr><td>Нитрат серебра, 99,8%</td><td>Wako</td><td>194-00832</td><td></td></tr><tr><td>Тринатрия цитрат дигидрат, 99. %</td><td>Wako</td><td>191-01785</td><td></td></tr><tr><td>Поли-L-лизин водный раствор, 0,1%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8920</td><td></td></tr><tr><td>3,3'-дисульфопропилтиацианин триэтиламин</td><td>Hayashibara Biochemical Laboratories</td><td>NK-2703</td><td>разновидность тиацианиновых красителей</td></tr><tr><td>3,3'-диэтил-5,5'-дихлор-9-метилтиакарбоцианин йод соль</td><td>Hayashibara Biochemical Laboratories</td><td>SMP-9</td><td>разновидность тиакаробоцианина красители</td></tr><tr><td>Sodium хлорид, 99,5%</td> <td>Wako</td><td>191-01665</td><td></td></tr><tr><td>Dimroth конденсатор</td><td>Iwaki</td><td>61-9722-22</td><td>получен от AS ONE</td></tr><tr><td>Магнитная мешалка</td><td>Corning</td><td>DC-420D</td><td></td></tr><tr><td>Масляная ванна</td><td>Advantech</td><td>OS-220</td><td></td></tr><tr><td>Стеклянная пластина</td><td>Matsunami</td><td>S-1112</td><td>Предметное стеклодувка микроскопа</td></tr><tr><td></td><td>Hozan</td><td>Z-288</td><td>Воздушная пыль</td></tr><tr><td>Жидкий блокиратор Ручка</td><td>Daido Sangyo</td><td></td><td>LIQUID BLOCKER (Super Pap Pen). Готовая к использованию гидрофобная барьерная ручка, предназначенная для иммуногистохимических приложений</td></tr><tr><td>Инвертированный микроскоп</td><td>Olympus</td><td>IX-70</td><td></td></tr><tr><td>Объектив</td><td>Olympus</td><td>LCPlanFl 60&times;</td><td>НК 0.7</td></tr><tr><td>Конденсатор темного поля</td><td>Olympus</td><td>U-DCD</td><td>NA 0.8&ndash; 0.92</td></tr><tr><td>Охлаждаемая цифровая ПЗС-камера</td><td>Hamamatsu</td><td>ORCA-AG</td><td>под управлением программного обеспечения Aqua Cosmos</td></tr><tr><td>Software для охлаждаемой цифровой ПЗС-камеры</td><td>Hamamatsu</td><td>AquaCosmos</td>, <td>используемая также для получения временных профилей из мигающих пятен на видео&nbsp;</td></tr><tr><td>Цветная ПЗС-камера</td><td>ELMO</td><td>TNC-C920</td><td>не используется для анализа</td></tr><tr><td>DPSS лазерной</td><td>RGB лазерной системы</td><td>NovaPro532-75</td><td>&lambda; = 532 нм; <бр/> 60 мВт (соответствует плотности мощности 600 Вт/см2)</td></tr><tr><td>Интерференционный фильтр</td><td>Semrock</td><td>LL01-532-12.5</td><td></td></tr><tr><td>Длинночастотный фильтр</td><td>Semrock</td><td>BLP01-532R-25</td><td></td></tr><tr><td>Программное обеспечение для различения и подсчета ярких/темных событий</td><td>домохозяйки</td><td></td><td>запрограммировано на C++</td></tr><tr><td>Программное обеспечение для подгонки по степенному закону</td><td>LightStone</td><td>Origin6.1</td><td></td></tr></tbody></table>

Наблюдение и анализ мигает поверхности расширение комбинационного рассеяния

Observation and Analysis of Blinking Surface-enhanced Raman Scattering

С одной молекулы на перекрестке Серебряный nanoaggregate наблюдается мигание поверхности расширение комбинационного рассеяния (Серов). Здесь, представлены протокол о том, как подготовить SERS-активные Серебряный nanoaggregate, запись видео некоторых мигающий пятен в микроскопических изображений и анализа мигающий статистики. В этом анализе власть закона воспроизводит распределения вероятностей для ярких событий по отношению к их продолжительность. Распределения вероятностей для темных событий установлены законом питания с экспоненциальной функции. Параметры власть закона представляют молекулярной поведение в ярких и темных государствах. Может быть оценена модель случайного блуждания и скорость молекулы по всей поверхности серебра. Трудно оценить даже при использовании средние, автокорреляционной функции и суперразрешением SERS изображений. В будущем власть закона анализы должны сочетаться с спектральных изображений, потому что истоки мигает не может быть подтверждено только методом анализа.

Из серебра nanoaggregates с поли L-лизин, подготовленный протокол 1.2 разноцветные мигающий пятна от SERS и поверхности расширение флуоресценции наблюдаются, как показано на рисунке 111. В отличие от монотонной цветные мигающий пятна от SERS наблюдались для серебряных nanoaggregates с молекулами красителя, подготовленный протокол 1.37,8,9...

Этот протокол описывает анализ мигает поверхности расширение комбинационного рассеяния вследствие случайного блуждания одной молекулы на поверхность серебра, с помощью силы законов.

From a single molecule at a silver nanoaggregate junction, blinking surface-enhanced Raman scattering (SERS) is observed. Here, a protocol is presented on ...

Общая цель данного анализа комбинационного рассеяния с усилением мигающей поверхности заключается в исследовании поведения отдельных молекул на поверхностях металлических наночастиц. Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области интерфейсов и науки о кораллах о рабочем поведении границ раздела твердых жидкостей Основное преимущество этого метода заключается в том, что можно собрать много данных, поскольку в одном видео можно одновременно наблюдать около дюжины мигающих пятен. Для начала этой процедуры промойте два предметных стекла микроскопа жидким моющим средством и водопроводной водой.Промойте предметные стекла дистиллированной водой и дайте им высохнуть на воздухе. Далее нанесите водный раствор 0,1-процентного поли-л лизина на одно сухое предметное стекло. Дайте раствору постоять на предметном стекле две-три секунды.Затем с помощью воздуходувки удалите излишки раствора и высушите предметное стекло. Далее нанесите на предметное стекло суспензию наночастиц коллоидного серебра. Дайте подвесу постоять две-три секунды.Высушите предметное стекло сжатым воздухом. Затем используйте гидрофобную барьерную ручку, чтобы полностью закрыть область размером 26 на 26 миллиметров на предметном стекле. Дайте барьеру высохнуть.Капните дистиллированную воду на предметное стекло, чтобы заполнить закрытую область. Накройте предметное стекло вторым чистым сухим предметным стеклом, чтобы предотвратить испарение воды. Поместите предметное стекло на предметный столик инвертированного микроскопа.Подсвечивайте предметное стекло белым светом через конденсатор темного поля. Фокусируйтесь на пятнах различных цветов, переключаясь с объектива с 2-кратным увеличением на объектив с 60-кратным увеличением. Затем используйте твердотельный лазер непрерывного излучения 532 нанометра с диодной накачкой, интерференционный фильтр полосового пропускания и линзу для освещения образца ослабленным лучом под углом 30 градусов относительно поверхности образца.Переместите лазерную подсветку в центр обзора и слегка отрегулируйте направление по оси Z предметного столика, чтобы уточнить фокус на пятнах. Наблюдайте за агрегатами как монотонными пятнами на однородном фоне. Затем выключите лазер и вставьте фильтр с длинным проходом после линзы объектива.Осветите образец лазером под углом 30 градусов относительно поверхности образца через интерференционный фильтр и внешнюю линзу. Перемещайте рабочую область в направлениях x и y, чтобы найти мигающие места. Затем используйте глубокую холодную цифровую ПЗС-камеру с временем кадра от 61 до 120 миллисекунд, чтобы получить 20-минутное видео пятен.Чтобы начать анализ, откройте полученное видео в программном обеспечении ПЗС-камеры. Нажмите и перетащите, чтобы выбрать области с мигающими пятнами и без них. Выполните временной анализ, чтобы получить временной профиль интенсивности сигнала для пятен и темных областей.Таким образом получите профили для всех мигающих пятен и темных областей интереса. Затем сгенерируйте распределения вероятностей для ярких и темных событий относительно их продолжительности. Разноцветные мигающие пятна наблюдались от ГЭРС серебряных наноагрегатов, приготовленных с покрытыми поли-л лизином предметными стеклами.Мигающий сигнал связан с случайным блужданием одиночных молекул на серебряных наноагрегатных переходах. Сигналы от одного наноагрегата показали различную интенсивность с течением времени, в отличие от мигающей флуоресценции квантовой точки. Пороговое значение для ярких событий было установлено на три стандартных отклонения от исходной интенсивности, а продолжительность ярких и темных событий была определена для каждого пятна.Распределение вероятностей ярких событий было построено в зависимости от длительности события в виде линии и логарифмического графика, в то время как распределение вероятностей темных событий было построено в зависимости от длительности в виде кривой. Поскольку продолжительность темных событий обычно была больше, чем ярких, степенные показатели для ярких событий, как правило, были меньше, чем для темных событий. Более короткое время усечения для темных событий указывало на более быстрое молекулярное случайное блуждание, более высокий энергетический барьер из неизлучающего состояния в излучающее состояние или комбинацию того и другого.После просмотра этого видео у вас должно сложиться хорошее представление о том, как наблюдать и анализировать явления мигающих SERS.

observation-and-analysis-of-blinking-surface-enhanced-raman-scattering

Research

JoVE Journal

Chemistry

Химия

Мы обсуждаем строительство и эксплуатация сложных нелинейных оптической системой, которая использует сверхбыстрый все-оптической коммутации, чтобы изолировать от комбинационного сигналов флуоресценции. С помощью этой системы мы можем успешно отдельных комбинационного и сигналов флуоресценции использования энергии импульсов и средней мощности, которые остаются биологически безопасна.

Отказ от флуоресцентного фона в резонанс и СКР микроспектроскопия

Источник: Эспиноза, Р.,  и др. Двухцветная визуализация комбинационного рассеяния света мыши в реальном времени для диагностики тканей. J. Vis. exp. (2022).  Видео демонстрирует двухцветную визуализацию срезов мозговой ткани мышей методом вынужденного комбинационного рассеяния света (SRS). Два синхронизированных лазерных луча направляются на участок ткани для возбуждения молекулярных колебаний, что приводит к изменению относительной интенсивности лучей. Липиды и белки в ткани обнаруживаются с...

Двухцветная визуализация вынужденного комбинационного рассеяния мышиной ткани

Мы описываем изготовление и характеристику нанобиологических систем, взаимодействующих наноструктурированных субстратов с иммобилизованными белками и аптамерами. Сообщается о соответствующих экспериментальных этапах, включающих литографическое изготовление наноструктурированных подложек, биофункционализацию и характеристику спектроскопии комбинационного рассеяния света с усилением поверхности (SERS). Продемонстрировано обнаружение поверхностно-иммобилизованных белков с помощью SERS и...

Поверхность Enhanced спектроскопии комбинационного рассеяния света обнаружения биомолекул Использование EBL, изготовленных наноструктурированных Субстраты

Мы описываем строительство быстрый спектрометр (CW-ГПС) continuous-wave-стимулировали Бриллюэна рассеяния. Спектрометр занято одночастотные лазеры диода и атомной пара паз фильтр для приобретения передач спектры мутная/не мутная образцов с высоким спектральным разрешением на скоростях до 100 раз быстрее, чем те из существующих CW-SBS спектрометров. Это улучшение позволяет высокоскоростной Бриллюэна анализ материала.<br...

Высокоскоростной непрерывном стимулировали Бриллюэна рассеяния спектрометр для анализа материалов

В этой рукописи описана реализация стимулируемого Раманского рассеяния (SRS) микроскопа, полученного путем интеграции экспериментальной установки SRS с лазерным сканющим микроскопом. Микроскоп SRS основан на двух фемтосекундных (fs) лазерных источниках, Ти-Сапфире (Ti:Sa) и синхронизированном оптическом параметрическом осцилляторе (OPO).

Реализация нелинейного микроскопа на основе стимулируемого рассеяния Рамана

Микроскопия с стимулированным рамановской рассеянием (SRS) позволяет селективно, без маркировки визуализировать конкретные химические части и эффективно используется для изображения липидных молекул in vivo. Здесь мы предоставляем краткое введение в принцип SRS-микроскопии и описываем методы его использования в визуализации хранения липидов у Caenorhabditis elegans.

Безметчная визуализация динамики накопления липидов у caenorhabditis elegans с использованием стимулированной рамановской рассеянной микроскопии

Микроскопия с стимулированным комбинационным рассеянием (SRS) является мощным, неразрушающим и безвечным методом визуализации. Одним из новых применений является стимулированная гистология комбинации, где двухцветная визуализация SRS на белковых и липидных рамановских переходах используется для генерации изображений псевдогематоксилина и эозина. Здесь мы демонстрируем протокол для двухцветной визуализации SRS в режиме реального времени для диагностики тканей.

Двухцветная стимулированная рамановская рассеянная визуализация мозга мыши в режиме реального времени для диагностики тканей

Представлен протокол получения химических изображений с помощью широкополосной стимулированной рамановской рассеяния (SRS) микроскопии. Основанный на микроскопе SRS, который работает с дифференциальным многоканальным обнаружением блокировки, протокол описывает подготовку образцов, настройку аппарата SRS и хемометрию для распутывания различных компонентов химически гетерогенных образцов.

Мультиплексная химическая визуализация на основе широкополосной стимулированной рамановской рассеянной микроскопии

Широкопольный микроскоп преобразования Фурье, основанный на компактном и сверхстабильном интерферометре с двупреломлением, позволяет параллельно получать спектры для всех пикселей двумерного детектора. Подход во временной области позволяет распутывать фотолюминесценцию и рамановские сигналы, а также позволяет быстро отображивать рамановское отображение (~5 мс/пиксель) с пространственным разрешением ~1 мкм и спектральным разрешением 23 см-1 .

Мультимодальный широкопольный микроскоп Фурье-преобразования Рамана

Здесь мы представляем протокол анализа отдельных малых внеклеточных везикулов (sEV) с использованием поверхностно-усиленной рамановской спектроскопии (SERS) без меток, что позволяет проводить малоинвазивную диагностику заболеваний и оценивать sEV как терапевтические средства доставки.

Изучение применения поверхностно-усиленного рамановского биосенсорирования отдельных sEV в диагностике и терапии заболеваний

Изучите метод анализа мигающего поверхностно-усиленного комбинационного рассеяния для исследования поведения отдельных молекул на серебряных наночастицах. Этот подход позволяет одновременно наблюдать множество мигающих точек.

Наблюдение и анализ мигает поверхности расширение комбинационного рассеяния

Больше видео