Хирургические методы для размещения катетера и 5/6 нефрэктомия в мышиных моделях перитонеального диализа

Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области перитонеального диализа о перитонеальных или системных изменениях в ответ на воздействие жидкости как в уремических, так и в неуремических условиях. Основные преимущества этого метода заключаются в том, что большое количество жидкости может вводиться внутрибрюшинно в течение длительного периода лечения, а также в том, что он позволяет использовать генетически модифицированных животных. Применение этого метода распространяется на терапию и диагностику структурного и функционального ухудшения брюшины, поскольку он облегчает потенциальное, терапевтическое стратегическое тестирование и оценку биомаркеров.

Впервые идея этого метода пришла нам в голову, когда мы предвидели необходимость использования генетически модифицированных мышей для запуска молекулярных сигналов, участвующих в повреждении брюшины. Для установки катетера, после бритья правых боков и спины каждого животного, подтвердите отсутствие реакции на защемление пальца ноги и нанесите мазь на глаза животного. Далее поместите первое животное на его левый бок на операционный стол и продезинфицируйте открытые участки кожи 1%-ным раствором глюконата хлоргексидина.

Тупыми ножницами сделайте надрез на 0,5 сантиметра надрезом кожи на правом боку тела. Затем осторожно отделите кожу от прилегающего мышечного слоя до тех пор, пока кожа, покрывающая всю спину животного, хорошо отделится. Сделайте разрез диаметром один миллиметр в мышечном слое через разрез кожи и вставьте кончик катетера и первое пластиковое кольцо в мышечный разрез.

Плотно сшить стенку брюшины вокруг катетера нерассасывающимся швом 5-0 или 6-0, при этом одно пластиковое кольцо находится внутри брюшинной полости, а другое – между мышцей и кожей. Швы должны быть подготовлены до того, как будет сделан разрез, и мышца не должна быть освобождена до тех пор, пока не будет введен катетер. В противном случае, поскольку разрез очень маленький, его может быть трудно найти снова.

Вставьте порт доступа в подкожное пространство по направлению к хвосту мыши и закройте рану вторым швом. Затем верните животное в клетку после полного лежания за грудиной. Через четыре-семь дней, чтобы начать лечение перитонеальным диализом, сначала загрузите в шприц два миллилитра жидкости для перитонеального диализа и продезинфицируйте кожу вокруг порта 1% раствором глюконата хлоргексидина.

Затем одной рукой удерживают животное за хвост и входное отверстие, а другой рукой вводят жидкость в порт с помощью скошенной иглы. Для нефрэктомии 5/6 и установки катетера, после подготовки животных к операции, как показано, сделайте разрез кожи размером 0,5 сантиметра с левой стороны животного близко к нижней части ребер. Откройте небольшой разрез в мышце, чтобы извлечь левую почку из брюшины, и удалите капсулу и надпочечник.

С помощью прижигания прижгите и порежьте конечности почки и верните почку в брюшную полость. Затем закройте мышечные и кожные раны нерастворимыми швами 5-0 или 6-0 и верните животное в клетку, когда оно полностью восстановится. На следующий день сделайте разрез кожи размером 0,5 сантиметра с правой стороны животного и отделите кожу на спине животного от мышцы, как показано на рисунке.

Сделайте разрез от 0,3 до 0,4 сантиметра в мышце и извлеките правую почку из брюшинной полости. Удалите капсулу и надпочечник и с помощью нерассасывающегося шва 5-0 или 6-0 для перевязки почечной вены, артерии и мочеточника. Теперь полностью удалите почку и вставьте катетер так, чтобы мышца оставалась между двумя пластиковыми кольцами, как показано на рисунке, прежде чем закрыть мышечную рану.

Введите порт доступа в подкожное пространство и закройте кожу, как показано на рисунке. Затем верните животное в клетку с контролем до полного выздоровления и дайте животному восстановиться в течение не менее 10 дней перед введением гиперосмотической жидкости, как показано. Периальные перитонеальные ткани мыши, полученные из наиболее удаленной области катетера, демонстрируют повышенную толщину и набор клеток во время диализа, что еще больше усугубляется у животных, подвергшихся нефрэктомии.

Эпителиальные клетки тимуса также демонстрируют измененную морфологию из-за деградации межклеточного соединения, вызванной перитонеальным диализом. Образцы сыворотки крови мышей, подвергшихся нефрэктомии, указывают на то, что нефрэктомия 5/6 вызывает уремическое состояние, увеличивая уровни уреинового азота в ходе эксперимента по сравнению с исходным уровнем. Более того, когда почки полностью функционируют, уровень уреинового азота остается аналогичным базальному состоянию, даже у мышей, подвергшихся воздействию перитонеальной диализной жидкости.

Эти техники могут быть выполнены за пять-семь минут. Без нефрэктомии, от 15 до 20 минут. Для прижигания левой почки от 20 до 25 минут.

Для правильного удаления почки и установки катетера, если его методика выполнена правильно. После своего развития этот метод проложил путь исследователям в области перитонеального диализа к изучению терапевтических вариантов сохранения брюшины у пациентов с почечной недостаточностью, подвергшихся лечению перитонеальным диализом.