Рыбы спермы оценки с использованием программного обеспечения и охлаждающих устройств

Основной целью этой процедуры является анализ качества спермы рыб на основе подвижности сперматозоидов, чтобы способствовать успешному искусственному оплодотворению. Я доктор Карлес Солер, профессор Университета Валенсии и научный руководитель PROiSER R+D. Меня зовут Карина Калдейра, я стипендиат проекта Impress.

Технология CASA была разработана несколько десятилетий назад для анализа спермы млекопитающих с использованием компьютерного анализа спермы. В случае с рыбой нужно учесть две вещи. Во-первых, эти животные обычно оплодотворяются при низких температурах, около четырех градусов, и по этой причине невозможно анализировать сперму при домашней температуре, но необходимо разработать специальные инструменты для охлаждения образцов.

Другая проблема заключается в том, что моторика очень быстро снижается после активации, и необходимо проанализировать этот факт, чтобы определить, что является хорошим моментом для анализа качества спермы. Итак, мы собираемся показать анализ спермы рыбы, и этот протокол будет модификацией протокола для млекопитающих, и будет включать анализ подвижности с использованием Итак, давайте начнем. Рыб обезболивают для инъекций гормонов, а через 24 часа собирают образцы спермы.

Область гениталий очищается во избежание загрязнения. Сперма собирается путем легкого надавливания. Образцы спермы хранятся при четырех градусах, пока не будет проведен анализ подвижности.

Разбавитель и активатор подготавливаются заранее. Установите блок охладителя на четыре градуса, чтобы поддерживать постоянную температуру образцов. Подождите, пока он стабилизируется.

Разбавьте образцы спермы с помощью разбавителя, специфичного для каждого вида. Для европейского угря сперма разводится в среде Р1, в соотношении 1:50. Приготовьте 500 микролитров разбавленной спермы, добавив 450 микролитров Р1, и 50 микролитров свежей спермы.

Хорошо перемешайте. Возьмите примерно четверть раствора активатора и поместите в блок охладителя. Установите охлаждающую ступень на четыре градуса.

Подождите, пока он стабилизируется. Выберите модуль моторики, и при необходимости используйте имя и пароль. Выберите свойства.

Нажмите на вид, и выберите рыбу. Выберите кадры в секунду и количество изображений, которые вы хотите использовать. В обязательном порядке необходимо использовать отрицательный контраст.

Выберите соответствующую счетную камеру и шкалу. Для каждого вида адаптируйте площадь частиц и связность. Для европейского угря минимальная площадь частиц должна быть равна двум, а связности – семи.

Сохраните конфигурацию. Откройте захват. Возьмите четыре микролитра раствора активатора, и поместите в камеру.

Хорошо гомогенизируйте разведенную сперму. Возьмите 5 микролитров спермы, и смешайте с активатором. Установите крышку.

Сфокусируйтесь на образце и найдите наилучшую визуальную область. Выберите захват видео, чтобы получить следы сперматозоидов, которые разделены по скорости. Можно захватить больше полей.

Выберите «Захват» и продолжите, как раньше. Нажмите на кнопку «Выход», чтобы получить общий вид всех полей. Сперматозоиды были взяты через определенные промежутки времени после активации.

Тем не менее, анализ спермы проводился для каждого временного интервала репликации. Частичный отчет за каждый временной интервал можно получить, выбрав поля и нажав на частичный. Лист Excel содержит средние значения частичных данных, диаграмм и изображений следов сперматозоидов.

Повторите ту же процедуру для других полей. Другой вариант — общие данные. Эти данные дают кинетические значения для отдельных сперматозоидов всех полей.

С помощью частичного отчета можно немедленно сравнить процентную подвижность и прогрессивность для разных времен с помощью круговых диаграмм. Общие данные дают возможность получить несколько статистических анализов с использованием кинетических параметров. Следы сперматозоидов дают три параметра.

VCL — криволинейная скорость, VSL — прогрессивная скорость и VAP — скорость траектории. VCL является наиболее важным параметром и изменяется в зависимости от количества кадров в секунду. При увеличении количества кадров VCL также увеличивается, что позволяет практически идеально анализировать треки.

Лучшая частота кадров может варьироваться в зависимости от вида. Цель состоит в том, чтобы найти наибольшее значение VCL, после чего можно будет наблюдать любые потенциальные различия с другими инструментами, такими как счетные камеры. Субпопуляции в настоящее время являются важным статистическим анализом, который дает больше информации о образце спермы.

Это пример образцов спермы атлантического лосося. Различные субпопуляции сперматозоидов могут наблюдаться в разных поколениях, произведенных в неволе. Мы показали, как использовать компьютерную систему для анализа спермы рыб, а также как оптимизировать технические и методологические аспекты, такие как камера подсчета, температура и частота кадров.

Таким образом, с помощью этих данных мы можем провести множество анализов в различных областях, таких как разведение рыбы, не только для аквакультуры, но и для программ по сохранению, филогенетических исследований или для расширения знаний о популяции сперматозоидов. Так что, я надеюсь, этот протокол поможет вам в учебе.