Типовых скрининг метод для микрочастиц в трансфузии тромбоцитов

Общая цель этого метода состоит в том, чтобы охарактеризовать трансфузии тромбоцитов с помощью рутинных тестов, которые могут быть выполнены в донорских центрах или больничных банках крови для оптимизации использования этих продуктов крови у пациентов с кровотечением или раком крови. Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в трансфузионной медицине, например, содержит ли переливание тромбоцитов активированные или неактивированные тромбоциты. Основное преимущество этой методики заключается в том, что она обеспечивает быстрый и точный скрининг на содержание микрочастиц в качестве доказанного показателя активации тромбоцитов.

Людям, плохо знакомым с этим методом, необходимо научиться брать образцы из сегментов трубок мешков, потому что в настоящее время это обычно не делается. Впервые у нас возникла идея этого метода, когда мы увидели, что тромбоциты от разных доноров имеют высокую вариабельность в статусе активации, и это, по-видимому, оказывает влияние на пациента. Существует три метода получения образца из концентрата тромбоцитов.

Чтобы взять образец из пакета, хорошо перемешайте содержимое пакетика с тромбоцитами легкими горизонтальными движениями в течение пяти секунд, наклоняя из конца в конец пять раз. Откройте зажим на подсумке, мешочек вакуумируется и заполнится сам. Не обязательно заполнять мешочек полностью, так как для тестирования на динамическое рассеяние света или DLS потребуется всего 100 микролитров образца.

Отсоедините пакет от пакета, запаяв соединительную трубку термосварщиком. При отборе проб из пустых трубок убедитесь, что трубка из пакета для тромбоцитов хранилась пустой и что блок трубок все еще на месте. Визуально осмотрите трубку, чтобы убедиться в отсутствии в ней концентрата тромбоцитов.

Закройте стриппер трубки на трубке, как можно ближе к блоку трубок, сжимая ручки, чтобы продавить трубку между роликами, при этом держа стриппер закрытым, отпустите блок трубок. Медленно потяните стриппер вниз по пустой трубке, позволяя трубке медленно заполняться за съемником. Продолжайте до тех пор, пока секция под съемником полностью не надуется или пока стриппер не окажется в пределах одного дюйма от конца трубки.

Очень важно плотно сжать ручки устройства для снятия трубок и медленно протянуть стриппер вниз по трубке. Как только стриппер будет достигнут точки остановки, используйте герметик для трубок, чтобы термосварить трубку на один дюйм выше стриппера. Теперь отпустите ручки ручного устройства для снятия трубок.

Снова выполните термосварку, на один-два дюйма выше предыдущего уплотнения, чтобы создать тестовый сегмент. Затем отрежьте тестовый сегмент от тромбоцитарного блока. Этот сегмент будет использоваться для тестирования DLS.

При отборе проб из трубки, которая не является пустой, повесьте мешок вертикально и отпустите блок трубки, если он на месте. Визуально осмотрите трубку, чтобы определить, есть ли на ней значительные твердые комки. Если твердые комки все же существуют, запечатайте их над ними, чтобы их нельзя было убрать в пакет.

Затем закройте средство для снятия трубок на трубке как можно ближе к герметичному концу трубки. Зачистите содержимое трубки в пакет, сжимая ручки, чтобы продавить трубку между роликами. Сохраняя усилие зажима, переместите стриппер пробирки вдоль трубки по направлению к мешку.

Снимите пакет с тромбоцитами с крючка для подвешивания и аккуратно перемешивайте пакет в течение пяти секунд, наклоняя его из конца в конец пять раз, при этом держа стриппер закрытым. Повесьте сумку вертикально, при этом стриппер держите закрытой. Медленно потяните стриппер вниз по пустой трубке, позволяя трубке медленно заполняться за съемником.

Продолжайте до тех пор, пока секция под съемником не будет полностью надута или пока стриппер не окажется в пределах одного дюйма от конца трубки. Как только стриппер будет достигнут точки остановки, используйте герметик для термосварки трубки на один дюйм выше стриппера. После отпускания стриппера снова запечатайте термосварку на один-два дюйма выше предыдущего уплотнения, чтобы создать тестовый сегмент.

Отрежьте и выбросьте последнюю часть трубки. Затем отрежьте тестовый сегмент от тромбоцитарного блока. Этот сегмент будет использоваться для тестирования DLS.

С помощью брызговика и чистых сухих ножниц отрежьте один конец пакетной трубки или тестового сегмента. Немедленно заполните капилляр с помощью инструмента для отбора проб, чтобы втянуть образец непосредственно из открытого пакета или сегмента трубки в капилляр. Запечатайте дно заполненного капилляра, осторожно вдавливая его в герметик капиллярной трубки, при этом слегка поворачивая и немного прижимая лоток к лотку.

Затем отсоедините пипетку и наконечник фиксированного объема объемом 100 микролитров от капилляра, убедившись, что капилляр остается прочно застрявшим в герметике капиллярной трубки. Извлеките капилляр из лотка для герметика капиллярной трубки и протрите изопропиловой спиртовой салфеткой. Убедитесь, что пузырьки воздуха не задерживаются, осторожно пожимая дно капилляра.

Наконец, поместите капилляр в систему DLS. Для начала запустите консоль, следуйте инструкциям на сенсорном экране, чтобы войти в систему, и выберите опцию теста на микрочастицы или MP, чтобы начать новый тест DLS для измерения содержания микрочастиц в образце тромбоцитов. Введите информацию об образце с помощью сканера штрих-кодов или введите ее вручную.

Поместите капилляр в систему DLS в соответствии с инструкциями и начните тест. После завершения испытания извлеките образец из держателя капилляра и утилизируйте расходные материалы в соответствии с инструкциями по эксплуатации. Пометьте пакетик с тромбоцитами цветом, соответствующим результату.

Например, оранжевый для неактивированных и розовый для активированных. Динамическое рассеяние света измеряет скорость частиц, движущихся во взвешенном состоянии под действием броуновского движения. Исходя из различных скоростей, мелкие частицы движутся быстро, а крупные — медленно.

Эта технология определяет распределение образца по размерам. DLS определяет, что это переливание содержит неактивированные тромбоциты в количестве менее 15% микрочастиц. Действительно. В основном дисковидные тромбоциты с очень небольшим количеством микрочастиц были видны при микроскопии.

Однако другое переливание тромбоцитов, которое невооруженным глазом выглядит точно так же, как и первый пакет, содержало активированные тромбоциты, основанные на содержании более 15% микрочастиц. В этом образце с помощью микроскопии были видны различные морфологии тромбоцитов, небольшие агрегаты и множество микрочастиц. После просмотра этого видео вы должны хорошо понимать, как вы неинвазивно берете образец из тромбоцитарного мешка, заполняете капилляр и проверяете образец на содержание микрочастиц, чтобы обеспечить оптимальное использование инвентаризации тромбоцитов.

При попытке выполнить эту процедуру важно хорошо перемешать пакет, чтобы получить хороший, репрезентативный образец. И после этой процедуры вы можете использовать другие методы, такие как проточная цитометрия, чтобы ответить на вопросы о клеточном происхождении микрочастиц. После освоения этой техники ее можно выполнить примерно за две с половиной минуты.

Вместе с пятиминутным тестом переливание тромбоцитов может быть охарактеризовано менее чем за восемь минут. После своего развития этот метод позволил больничным банкам крови проводить скрининг своих запасов тромбоцитов, лечить гематологических/онкологических пациентов только неактивированными тромбоцитами и наблюдать снижение используемых переливаний тромбоцитов. Как мы говорим, самое безопасное переливание – это то, которое не делается.

Хотя этот метод дает представление о характеристике тромбоцитов до переливания, он также может быть использован для тестирования обогащенной тромбоцитами плазмы непосредственно от доноров. Применение этого метода распространяется на лечение пациентов с раком крови, потому что они получают пользу от неактивированных переливаний тромбоцитов, которые снижают риск развития рефрактерности.