Систематическая оценка благосостояния в мышах для процедур с использованием общего наркоза

Общая цель этого протокола состоит в том, чтобы оценить состояние мышей после того, как они прошли процедуры, включая общую анестезию, и предоставить научно обоснованные данные для поддержки классификации тяжести в соответствии с директивой ЕС 2010/63. Этот протокол может помочь ответить на ключевые вопросы о благополучии животных в области науки о лабораторных животных, такие как степень дистресса, вызванного процедурами с общей анестезией. Основное преимущество этого протокола заключается в том, что благополучие каждой отдельной мыши оценивается научным способом, основанным на животных, и этот протокол может быть легко адаптирован и интегрирован в другие запланированные исследования.

Впервые идея этого протокола пришла нам в голову, когда мы предположили, что если повторная анестезия вызовет больший стресс у лабораторных мышей, чем однократное воздействие, то научно обоснованные данные будут отсутствовать. На этом этапе подготовьте стеклянный ящик с площадью пола примерно 220 миллиметров на 290 миллиметров и высотой 390 миллиметров. Застелите пол примерно 0,5 сантиметрами подстилочного материала.

Затем рассыпьте горсть использованного материала для подстилки из домашней клетки поверх нового материала подстилки, чтобы уменьшить неудобства, вызванные новой обстановкой. Обеспечьте едой и водой. Аккуратно переложите мышь в клетку для наблюдения и дайте ей привыкнуть к новой среде не менее 30 минут.

Для масштабирования гримас мыши используйте камеру высокой четкости для фотосъемки. Непрерывно делайте от 30 до 40 фотографий для каждой временной точки в течение одной-двух минут. Для проверки поведения при рытье нор по Дикону и Йиркофу подготовьте норы, поместив 140 граммов пищевых гранул в стандартную непрозрачную пластиковую бутылку для воды.

Далее поместите пластиковую бутылку с водой, наполненную пищевыми гранулами, параллельно задней стенке смотровой клетки. Через два часа взвесьте оставшиеся в норе гранулы пищи. Проведите тест дважды за два дня до процедуры в качестве исходного уровня.

На этом этапе подготовьте клетку с новым материалом подстилки для 24-часового периода наблюдения, в котором мыши размещаются по отдельности. 24-часовой период наблюдения начинается после того, как мышь поморщилась, подняла чешуйку и поступила в роющую яму. Продолжительность проживания в одноместном жилье сведена к минимуму.

В то же время измеряется активность в домашней клетке, потребление пищи, поведение при строительстве гнезд и уровни метаболитов кортикостерона в фекалиях. Затем разбросайте горсть использованного подстилочного материала без фекалий из домашней клетки поверх нового материала, чтобы уменьшить стресс. Предоставьте стандартизированное квадратное гнездо из хлопка определенного веса только для обогащения окружающей среды.

После этого установите инфракрасный датчик на верхнюю часть клетки для измерения активности домашней клетки. Обеспечьте мышь стандартными пищевыми гранулами и водой в неограниченном количестве и поместите ее в клетку. На следующее утро оцените гнездо по пятибалльной шкале Дикона примерно через два часа после того, как зажгется свет.

Кроме того, взвесьте любой неразорванный кусок гнезда, на долю которого приходится не менее 5% от первоначального веса гнезда. Затем поместите в клетку столешницу с сеткой под углом 45 градусов к более длинной стороне клетки. Запустите таймер и монитор или видеозапись мышей в течение 10 минут с расстояния примерно 1,5 метра.

Обратите внимание на все случаи, когда мышь забирается на верхнюю часть клетки, держа все четыре лапы на верхней части клетки, или покидает верхнюю часть клетки, положив одну или несколько лап на пол клетки, с последующим анализом. Однократный опыт анестезии, а также повторная анестезия увеличивали разницу по шкале гримас мыши по сравнению с контролем через 30 минут после воздействия. Через 150 минут после последней анестезии разница в шкале гримас мышей у всех мышей вернулась к контрольному уровню.

Что касается роющего поведения, то только повторная анестезия значительно снижала процент веса пищевых гранул, которые мыши извлекали из норы по сравнению с контрольной группой. Что касается поведения при строительстве гнезда, то не было существенных различий в оценках гнезда между однократным опытом анестезии, повторной анестезией и контролем. В парадигме свободной разведки повторная анестезия значительно сократила количество исследований по сравнению с контролем и общую продолжительность исследования по сравнению с однократной анестезией через один день после последней анестезии.

Через восемь дней после последней анестезии различий между исследуемыми группами уже не было. При использовании этого протокола важно помнить о работе с мышами туннельным и/или баночным методом. Взятие мышей за хвост может вызвать стресс и беспокойство, что, в свою очередь, влияет на самочувствие, а также может повлиять на результаты протокола.

Этот протокол может быть легко адаптирован и интегрирован в запланированные исследования для оценки влияния процедуры на благополучие мышей. В зависимости от процедуры и дизайна исследования следует выбрать наиболее подходящий тест этого протокола. Посмотрев это видео, у вас будет хорошее понимание того, как оценить самочувствие мышей, перенесших процедуру общего наркоза.

Протокол помогает классифицировать тяжесть процедуры с научной точки зрения на животных.