Прижизненные изображения двух Фотон лейкоцитов во время иммунный ответ в мыши Липополисахарид лечение печени

Общая цель этой процедуры заключается в наблюдении за морфологией и функциональностью лейкоцитов внутри печени во время септического шока. Основное преимущество этой методики заключается в том, что можно получить прямые видео лейкоцитов внутри печени. Перед операцией используйте 70% этанол для дезинфекции операционного стола и всех инструментов.

Затем настройте инструменты для операции на печени и отрегулируйте нагревательную пластину до 37 градусов Цельсия. После обезболивания мышей, введенных ЛПС или ПБС в соответствии с текстовым протоколом, нанесите небольшое количество глазной мази, чтобы предотвратить высыхание сетчатки. Используйте бритву и крем для удаления волос вокруг живота.

Затем используйте влажную марлю, чтобы очистить живот. Во время проведения ретроорбитальной инъекции с помощью инсулинового шприца введите 200 микролитров раствора техасского красного декстрана. С помощью маркера отметьте правую подреберную область от ксифоидного отростка до конца ребра.

Затем нанесите повидон-йод на брюшную полость мыши, чтобы предотвратить вторичное заражение. Используйте щипцы и ножницы, чтобы разрезать эпидермис. Далее с помощью микроножниц и щипцов вскрывают брюшную полость и осторожно обнажают печень.

С помощью ватных палочек раскатайте левую боковую долю. Затем вылейте 500 микролитров стерильного PBS на брюшную полость, чтобы предотвратить пересыхание печени. Поместите мышь в правильное положение пролежня в специально разработанную камеру и нанесите небольшое количество тканевого клея на силиконовую подушку.

Затем с помощью ватных палочек аккуратно приложите печень. Ткань печени чрезвычайно рыхлая. Никогда не используйте острые или тяжелые инструменты при обнажении и удержании печени.

Через несколько секунд снова смочите печень 500 микролитрами стерильного PBS, чтобы предотвратить ее высыхание. Затем поместите металлический каркас на печень и с помощью орехов прочно закрепите его. Всегда ставьте опорные гайки перед установкой металлической рамы.

Это поможет снизить давление металлического каркаса. Чтобы провести прижизненную визуализацию печени, запустите программу Дзен для включения лазера. Установите длину волны на 880 нанометров и установите зеленый и красный каналы.

Затем отрегулируйте мощность лазера в соответствии с интенсивностью флуоресценции. Поместите камеру на столик для визуализации и расположите линзу погружного объектива мощностью 20 мощности водного объектива близко к защитному стеклу. Закрепите нагреватель из силиконовой резины под корпусом мыши, чтобы поддерживать температуру ее тела.

Далее наберите на металлический каркас 500 микролитров дистиллированной воды. А затем расположите линзу объектива близко к печени. Отрегулируйте фокус и определите глубину и время области съемки.

Для длительной визуализации по этическим причинам вводите половину дозы ранее приготовленной анестезирующей смеси Золетил и Ромпун в течение каждого часа во время визуализации. Поддерживайте температуру тела на уровне 37 градусов по Цельсию и всегда следите за мышью, так как время обезболивания у каждой мыши разное. Чтобы проанализировать данные, откройте Velocity и импортируйте исходные данные из библиотеки.

Затем удалите шум с изображения и сделайте снимок. Наконец, подгоните отредактированные элементы на 100% и экспортируйте файлы в виде файлов JPEG или TIF для снимков изображений и файлов AVI для фильмов. Прижизненный визуализирующий анализ контрольных мышей показал, что в кровеносном сосуде циркулирует небольшое количество нейтрофилов.

В свою очередь, количество нейтрофилов было значительно увеличено у мышей, получавших ЛПС. В состоянии ЛПС большое количество нейтрофилов циркулировало внутри кровотока, но они не мигрировали за пределы сосуда. Как видно из этих фильмов, по сравнению с контрольными мышами, нейтрофилы у мышей, получавших ЛПС, были более прочно прикреплены к люминальной поверхности сосуда, что делало нейтрофилы более часто обнаруживаемыми в сосуде.

Помимо подвижности нейтрофилов, капсульные макрофаги печени, или LCM, у мышей CX3CR1-GFP наблюдались на поверхности ткани печени, а не глубоко внутри нее. Кроме того, ЛКМ показали незначительную подвижность или активацию в печени даже у мышей, получавших ЛПС. После освоения этой техники ее можно выполнить за 30 минут, если она выполнена правильно.

При попытке проведения этой процедуры важно помнить о необходимости установки линии разреза от мечевидного отростка до конца правой подреберной брюшной полости. После этой процедуры могут быть выполнены другие методы, такие как лечебные инъекции, чтобы ответить на дополнительные вопросы, например, как печень восстанавливается после повреждения и инфекции. После своего развития этот метод проложил путь исследователям в области медицины к изучению реакции лейкоцитов во время сепсиса и тестированию потенциальных лекарств.

После просмотра этого видео у вас должно сложиться хорошее представление о том, как обнажить печень с минимальным разрезом на брюшной полости. Не забывайте, что работа с липополисахаридом может быть чрезвычайно опасной, и при выполнении этой процедуры всегда следует соблюдать меры предосторожности, такие как стерилизация и мытье рук.