Стратегий выборки и обработки образцов ткани биобанка из свинины биомедицинской модели
6 марта 2018 г.
Демонстрируются практического применения и производительности методов для генерации образцы представительной ткани свинину животных моделей для широкого спектра течению анализов в биобанке проектов, включая volumetry, систематического случайной выборки, и дифференциальный обработка образцов ткани для качественных и количественных анализов молекулярных и морфологических типов.
В этом видео демонстрируются два ключевых метода отбора проб и обработки образцов тканей свиней из биобанков. Метод погружения надежно оценивает общий объем органов и тканей, а метод ориентатора генерирует случайные изотропные срезы ткани для объективной оценки количественных морфологических параметров. Основное преимущество метода погружения для определения плотности тканей заключается в том, что его можно применять к любому типу ткани и что он дает надежные результаты как для маленьких, так и для больших образцов.
Преимущества методики ориентатора заключаются в том, что она отличается высокой эффективностью, а также работает с большими образцами тканей. Для начала волюметрии для большого органа иссекайте из органа кусок ткани соответствующего размера. Тщательно промокните образец бумажным полотенцем, чтобы удалить лишнюю кровь и тканевую жидкость.
Затем взвесьте образец на прецизионных весах и запишите вес образца. Добавьте 0,9% физиологического раствора в стакан подходящего размера. Не заполняйте стакан полностью, чтобы предотвратить переполнение во время всплытия тканей.
Поместите стакан на весы, затем погрузите щипцы или самодельный держатель для образцов в физиологический раствор, пока метка на щипцах или держателе для образцов не достигнет жидкости. Далее сбросьте отображение шкалы в ноль. Осторожно приложите образец ткани к щипцам или держателю для образцов и полностью погрузите образец в физиологический раствор до достижения отмеченного положения.
Для записи надежных измерений плотности важно убедиться, что образец полностью погружен в воду, и избегать любого контакта погруженного образца с внутренними стенками или дном стакана. Удерживая образец в нужном положении, запишите вес, отображаемый на весах. Используйте это измерение и плотность физиологического раствора при комнатной температуре для расчета объема образца.
Затем рассчитайте плотность образца ткани из веса образца и его объема. Для крупных органов и тканей, таких как эта почка, выполните повторные измерения с несколькими образцами и рассчитайте среднюю плотность по одним измерениям. Для небольших образцов и небольших органов, измеряемых в целом, таких как гипофиз, повторите измерение три раза, прежде чем рассчитать среднюю плотность органов по одним значениям измерения.
Наконец, рассчитайте общий объем органа, ткани или компартмента органа по его весу и плотности. Поместите неподвижный образец ткани на отпечаток равноугольной окружности с одним краем, параллельным направлению от нуля до 180 градусов. Затем используйте таблицу случайных чисел для определения случайного угла.
Найдите соответствующие отметки в масштабе равноугольной окружности. С помощью этих меток разрежьте срез образца плоскостью сечения, ориентированной параллельно направлению случайного угла, указанного на шкале равноугольной окружности, и вертикалью к поверхности покоя образца. Поместите тканевый блок поверхностью сечения вниз на косинусный утяжеленный круг.
При этом край поверхности покоя располагают параллельно направлению «один к одному». Теперь разрежьте новый участок через образец под случайным углом, определенным с помощью таблицы случайных чисел. Результирующая плоскость сечения представляет собой изотропное равномерное случайное сечение.
В этой таблице показана репрезентативная плотность нескольких тканей и органов свиньи, определенная с помощью метода погружения. Большинство тканей свиньи демонстрируют значения плотности немного выше, чем тот, который относится к плотности воды. В то время как ткани, плавающие в солевом растворе, такие как жировая ткань, например, демонстрируют плотность ниже единицы.
На этом рисунке показаны четыре репрезентативных среза IUR миокарда левого желудочка свиньи, полученных с помощью ориентаторной техники. Обратите внимание на измененные углы резания в разных разделах IUR. После освоения техника погружения для определения плотности тканей может быть выполнена за несколько минут.
Если она выполнена правильно. Изотропные однородные случайные срезы ткани, полученные с помощью ориентаторного метода, пригодны для оценки любых количественных морфологических параметров с использованием соответствующих методов стереологического анализа. Цифровая музыка.
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео
Обзор
В данном видео демонстрируются две основные методики отбора проб и обработки образцов тканей свиньи из биобанка. Метод погружения используется для оценки общего объема органов и тканей, в то время как метод ориентации позволяет получать случайные изотропные срезы тканей для объективного количественного морфологического анализа.
Основные компоненты исследования
Область науки
- Нейробиология
- Биобанкинг
- Методы забора образцов тканей
Введение
- Надежный отбор проб тканей имеет решающее значение для проектов биобанков.
- Понимание объема и морфологии тканей помогает в проведении различных видов анализа.
- Модели свиней широко используются в биомедицинских исследованиях.
- Эффективные методы позволяют повысить качество образцов тканей.
Цель исследования
- Продемонстрировать эффективные методы забора проб тканей из моделей свиней.
- Представить надежные методы волюметрического анализа.
- Обеспечить объективную морфологическую оценку посредством рандомизированного отбора проб.
Используемые методы
- Метод погружения для оценки объема ткани.
- Метод ориентатора для получения изотропных срезов ткани.
- Промакивание образцов для удаления избытка крови и жидкости.
- Применение данных методов как к малым, так и к большим образцам тканей.
Основные результаты
- Метод погружения позволяет получать надежные оценки объема для различных типов тканей.
- Метод ориентации эффективен для крупных образцов.
- Оба метода повышают точность определения морфологических параметров.
- Результаты подтверждают целесообразность применения данных методов в проектах биобанков.
Выводы
- Эффективные методы отбора проб тканей имеют решающее значение для качественного биобанкинга.
- Для использования валидированы как метод погружения, так и метод с использованием ориентирующего устройства.
- Эти методы могут значительно улучшить результаты исследований в области нейробиологии.
Часто задаваемые вопросы
Практическая значимость для промышленности
Стандартизированный отбор проб и обработка тканей из биобанка свиней напрямую влияют на воспроизводимость и трансляционную значимость доклинических моделей в биофармацевтических исследованиях и разработках. Надежные волюметрические и морфологические данные, полученные из ограниченного числа высокоценных моделей животных, позволяют проводить уверенное сравнение между исследованиями и повышают прогностическую достоверность на ранних этапах поиска. Эти валидированные методы обосновывают решения по формированию портфеля препаратов, гарантируя качество образцов для последующих молекулярных и количественных анализов.
Стратегическое применение в биофармацевтических исследованиях и разработках
Первичное обнаружение и валидация мишеней
- Обеспечивает возможность строгого тестирования гипотез за счет предоставления репрезентативных и несмещенных образцов тканей.
- Поддерживает функциональную валидацию мишеней посредством стандартизированного количественного морфологического анализа.
- Способствует снижению биологических рисков, обеспечивая сопоставимость образцов в различных исследованиях и между разными исследователями.
- Повышает прогностическую уверенность при разработке релевантных моделей заболеваний на свиньях.
Скрининг и разработка анализа
- Подготовка валидированных образцов тканей, подходящих для широкого спектра последующих анализов.
- Обеспечение воспроизводимости и стандартизации ориентации, размера и обработки образцов.
- Получение количественных данных, необходимых для калибровки анализа и подготовки к скринингу.
- Обеспечение надежной оценки воздействия соединений в трансляционных тканевых системах.
Трансляционные и доклинические исследования
- Приводит качество образцов биобанка в соответствие с требованиями к трансляционным исследованиям биомаркеров.
- Обеспечивает непрерывность процесса от стадии открытия до доклинической валидации за счет поддержки различных модальностей анализа.
- Снижает риск биологического отказа на поздних стадиях, обеспечивая пригодность образцов для будущих, еще не определенных видов анализа.
- Обеспечивает снижение механистических рисков с помощью объективных количественных морфологических данных.
Интеграция конвейера и рабочего процесса
Данные методы отбора и обработки проб позволяют использовать ткани из свиного биобанка в качестве базового ресурса на всех этапах — от начальных открытий до доклинических исследований, обеспечивая поддержку при проверке гипотез, разработке методов анализа и проведении трансляционных исследований.
- Открывающая биология: обеспечивает надежную проверку нулевой гипотезы и уточнение путей передачи сигналов посредством непредвзятого количественного анализа тканей.
- Скрининг: позволяет получать стандартизированные воспроизводимые образцы, готовые для высокопроизводительного или специализированного анализа.
- Аналитика: обеспечивает точные волюметрические и морфологические измерения для сравнительного анализа и статистической достоверности.
- Трансляционные исследования: гарантируют целостность образцов для согласования биомаркеров и валидации моделей, соответствующих конкретным заболеваниям.
- Корпоративное повторное использование: создает ресурс биобанка многократного использования, адаптируемый к меняющимся аналитическим потребностям.
Операционное и корпоративное воздействие
- Научная ценность: Повышает прогностическую достоверность и снижает механистическую неоднозначность в исследованиях на основе моделей.
- Операционная ценность: Способствует стандартизации, воспроизводимости и масштабируемости рабочих процессов отбора проб тканей.
- Стратегическая ценность: Обеспечивает принятие обоснованных решений о продолжении или прекращении разработки (go/no-go), а также эффективно управляет капиталом портфеля.
- Влияние на портфель: Поддерживает приоритизацию с учетом рисков и продвижение трансляционных моделей.
Особенности реализации
- Требуются экспертные знания в области методов объемного и стереологического отбора проб.
- Необходимо наличие высокоточного оборудования для взвешивания, секционирования и проведения процедур рандомизации.
- Требуется строгое соблюдение стандартизированных протоколов всеми группами исследователей для обеспечения сопоставимости данных.
- Методика должна быть адаптируема к различным системам органов и типам тканей в моделях свиней.
- Результаты зависят от тщательного документирования ориентации образцов, их размера и параметров обработки.
Часто задаваемые вопросы по биофармацевтике
Chapters in this video
0:04
Title
0:48
Submersion Technique for Determination of Tissue/Organ Densities
2:50
“Orientator” Technique for Generation of Isotropic Uniform Random Tissue Sections
3:56
Representative Results: Porcine Biobank Tissue Densities and IURs
4:36
Conclusion
