Частичной гепатектомии лобулярного: Хирургические модель для морфологической регенерации печени

Общая цель этой хирургической процедуры заключается в том, чтобы вызвать морфологическую регенерацию печени с помощью частичной лобулярной гепатэктомии. Этот метод может ответить на ключевые вопросы в области биологии стволовых клеток и регенеративной медицины о морфологической регенерации печени и специфических для печени стволовых клетках. Основные преимущества данной методики заключаются в том, что она является малоинвазивной и не требует химических ударов или прижигания.

Прежде чем прикасаться к животным, потрите подстилку из клетки матери о перчатки. Затем переложите всех щенков и часть подстилки из клетки матери в пустую клетку поверх грелки. Далее поместите щенка под препарирующий микроскоп.

После подтверждения соответствующего уровня седации отсутствием реакции на защемление пальца ноги используйте небольшую марлевую салфетку для дезинфекции задней брюшной стенки животного бетадином. С помощью микрорассекающих ножниц и щипцов сделайте левый среднеключичный полусантиметровый разрез сразу под грудной клеткой. С помощью щипцов аккуратно отделите кожу.

Затем сделайте второй более глубокий разрез в брюшной полости и используйте задний тупой край микрорассекающих ножниц и щипцов, чтобы оказать мягкое боковое давление на обе стороны живота, выталкивая верхушку левой доли из брюшной полости. Когда видна левая верхушка левой доли, ампутируйте соответствующее экспериментальное количество ткани из доли и поместите ткань в 1,5-миллилитровую пробирку PBS на льду. С помощью свернутого куска марли аккуратно верните левую долю в брюшную полость.

Снимите марлю, когда кровотечение остановится, и смочите место операции и прилегающую область марлей, смоченной PBS. Закройте место операции швами и бегущим швом. Затем аккуратно, но тщательно накатайте пропитанную PBS марлю на щенка и место раны, убедившись, что на нем не осталось крови или бетадина.

Дайте щенку восстановиться рядом с марлевыми салфетками, на которые попадают фекалии и моча матери. Когда все детеныши будут подвергнуты гепатэктомии, верните всех животных и подстилку в клетку матери. После взвешивания долей зафиксировать образцы тканей в 2%-ном параформальдегиде на один час при комнатной температуре.

В конце фиксации перенесите ткани в отдельные формы для замораживания, содержащие оптимальную среду для резки для замораживания на сухом льду. И получить 7-10 микрометровые срезы каждой доли с помощью любого стандартного криостата. Проверяйте щенков ежедневно в течение как минимум 56 дней, чтобы убедиться, что их раны остаются закрытыми, и вводите обезболивание через 24 и 48 часов после операции.

В соответствующей экспериментальной конечной точке собирают и взвешивают печень от каждого детеныша на блоке. Затем осторожно отделите каждую отдельную долю в месте ее проксимального прикрепления и сравните массу ампутированной левой доли с массой всей печени, чтобы определить степень регенерации в каждой доле. Незначительная регенерация левой доли может наблюдаться через 7-14 дней после операции, а полная регенерация часто наблюдается через 56 дней.

Без существенной разницы в участках гепатоцитов в регенерированной печени выявлено при гистологическом анализе. Кроме того, инъекции EdU неонатальным мышам указывают на значительное увеличение количества пролиферирующих клеток в поврежденной регенерирующей левой доле по сравнению с неповрежденной контрольной группой, что позволяет предположить, что пролиферация клеток способствует регенерации левой доли у новорожденных. Однако гепатэктомия у молодых мышей на 14-й день после рождения приводит к снижению регенерации в левой доле с увеличенной компенсацией из неповрежденных долей.

Это указывает на то, что к 14 дням реакция травмы на острую резекцию переключается с регенерации специфической доли на глобальную компенсацию. После освоения этой техники она может быть выполнена в течение 15 минут при правильном выполнении. Пытаясь выполнить эту процедуру, важно быть как можно более осторожным, чтобы не вызвать лишний стресс у матери или щенков.

После этой процедуры могут быть использованы другие методы, такие как серийные гепатеомии или хронические повреждения печени, для дальнейшей оценки регенеративного потенциала печени. После своего развития этот метод проложил путь исследователям в области биологии стволовых клеток к изучению регенерации печени у неонатальных мышей. После просмотра этого видео у вас должно сложиться хорошее представление о том, как выполнить специфическую контролируемую ампутацию доли печени неонатальной мыши.

Не забывайте, что работа с изофлураном чрезвычайно опасна, и при выполнении этой процедуры всегда следует соблюдать меры предосторожности, такие как маска для лица и перчатки.