Оценка деятельности на основе анорексия у мышей

Общая цель этого эксперимента — изучить нейробиологию и поведение, лежащие в основе нервной анорексии. Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области психиатрии, связанные с расстройствами пищевого поведения, например, каковы нейронные основы нервной анорексии и какие мозговые цепи задействованы. Основное преимущество этой методики заключается в том, что она может быть использована для изучения некоторых основных механизмов анорексии, которые не могут быть оценены у людей.

Обустройте экспериментальную зону, выбрав стойку для клетки рядом с ноутбуком и ступицами колес. Это ограничит проблемы с передачей данных. Теперь активируйте соединение между ступицами колес и программным обеспечением.

Сначала откройте программное обеспечение для управления рулем, чтобы убедиться, что оба беспроводных концентратора активны. В программном обеспечении сбросьте стандартные соединения колес. Откройте инструменты и выберите «Удалить колеса».

Повторите этот шаг пять раз, затем закройте программу и снова откройте ее. Далее подайте мощность на колеса. Подсоедините провода аккумуляторной батареи к колесной фурнитуре и вставьте батареи в колесную базу.

Затем взгляните на программное обеспечение. Колесная база должна быть указана вместе с идентификатором одного из них под соответствующим беспроводным концентратором. Если нет, отсоедините аккумуляторную батарею, удалите руль в программном обеспечении и повторите попытку.

Если колесо распознано, замените идентификатор на идентификатор соответствующего животного.Затем приклейте основание бегового колеса к нижней части клетки с помощью клейкой ленты для обеспечения устойчивости. Не позволяйте ленте торчать, так как мыши будут грызть открытую ленту. Затем поместите диск ходового колеса без корродированного магнита на основание и поверните колесо, чтобы проверить зазор от стенок каркаса и решетки.

Вращайте диск и убедитесь, что каждый оборот правильно регистрируется программным обеспечением. Далее с помощью клейкой ленты закрепите банку с кормом к клетке. Расположите его подальше от бегового колеса и бутылки с водой.

Затем положите в банку два кусочка корма, прикрепите к клетке полную бутылку с водой и добавьте подстилку на дно клетки. После того, как все клетки будут подготовлены таким образом, по отдельности поместите мышей в соответствующие клетки. Как только все мыши окажутся в своих клетках, перейдите в программу и нажмите на файл, а затем начните сбор

На протяжении всего эксперимента начинаются новые сборы, чтобы разбить фазы испытаний. Теперь дайте мышам акклиматизироваться к жилищным условиям в течение двух полных дней. На этом этапе решите, достаточно ли здорова каждая мышь, чтобы выдержать эксперимент ABA.

На третий день эксперимента отмерьте около девяти граммов чау и запишите вес с точностью до 1/1000 грамма. Далее аккуратно извлеките мышь из клетки и взвесьте ее в большом пластиковом стакане с точностью до и ближайших десятых долей грамма. Делайте это с минимальным напряжением для мыши.

Вытащив мышь из клетки, найдите и уберите всю еду в клетке. Помимо удаления продуктов из банки, просмотрите подстилку на предмет разбросанной еды. Далее, при необходимости, очистите беговое колесо 70% изопропанолом и бумажными полотенцами.

Прежде чем вернуть мышь в клетку, убедитесь, что изопропанол высох. Затем загрузите мышь и девять граммов чау в клетку. На следующий день вернитесь в помещение для животных в течение 10 минут после последнего визита.

Снова загрузите девять граммов чауп в небольшой пластиковый стакан и запишите точный вес. Снова аккуратно извлеките мышь и взвесьте ее с минимальным напряжением для мыши. Теперь выньте банку с едой из клетки и исследуйте ее.

Удалите кал пинцетом и нанесите на стакан ситечко, чтобы удалить подстилку. Более крупные кусочки пищи покрошите так, чтобы они прошли через фильтр, оставив в ситечке только подстилку. Затем обыщите подстилку клетки на предмет остатков пищи и добавьте их в стакан.

Затем записывают массу корма, который остался в клетке. Далее протрите банку начисто и верните ее в клетку пустой. При необходимости наклейте новую ленту.

Затем загрузите в банку подготовленный девятиграммовый рацион питания. Как и раньше, очистите все загрязненные ходовые колеса и верните их в клетки. Сбрасывайте все клетки таким образом каждый день.

На пятый, седьмой и девятый дни перезапустите компьютерную программу сбора данных в колесном режиме. После сбора исходных данных на 11-й день возобновите сбор данных и начните фазу ограничения. В общем, следуйте базовому протоколу с некоторыми изменениями.

Во-первых, не очищайте ходовые колеса при смене корма. Во-вторых, ограничьте доступ животных к их девятиграммовому рациону до шести часов. Период кормления может быть дневным или ночным.

Оба варианта заслуживают внимания. Через шесть часов взвесьте оставшийся в банке и клетке корм. На этом этапе, при необходимости, очистите колесо, но сделайте это быстро, чтобы можно было быстро обработать следующую клетку.

В каждый день фазы ограничения повторяйте эту процедуру. Сейчас очень важным становится следить за потерей веса у животных. Если масса мыши упадет до 75% от исходной массы тела, исключите ее из эксперимента.

Обеспечьте этих мышей неограниченным количеством пищи с пола клетки и без доступа к беговому колесу. После того, как все клетки будут оценены, усыпьте упавших мышей, если не требуется изучение их восстановления. С помощью описанного эксперимента была оценена группа мышей с анорексией, основанная на активности, а также три контрольные группы.

После описанной процедуры прием пищи был ограничен до шести суточных часов. Когда мышь была исключена из исследования из-за чрезмерной потери веса, случайно выбранная контрольная мышь также была исключена. Масса тела была снижена с первого по пятый дни в обеих группах, подвергшихся запланированному кормлению, и это логически коррелировало с уменьшением потребления пищи.

Любопытно, что потеря веса никак не повлияла на активность при беге на колесах. После изучения поведения мозг был собран и заморожен для биохимического анализа. Один анализ тканей из вентральной тегментальной области показал, что движение колесом значительно увеличивает экспрессию BDNF, в то время как ограничение приема пищи увеличивает экспрессию NCAM1 MRNA, но не изменяет экспрессию BDNF MRNA.

Пытаясь выполнить эту процедуру, важно помнить об ограничении нагрузки на мышей, быть последовательным в определении времени измерений, быть терпеливым, чтобы получить точные показания, и постоянно проверять программное обеспечение для работы колеса на наличие любых технических проблем. После этой процедуры на мозге мышей могут быть применены другие методы, такие как иммуногистохимия и связывание радиолигандов, чтобы ответить на дополнительные вопросы, относящиеся к функции вируса в парадигме анорексии.