Модель в наркотизированных конкретного возбудителя бесплатные куры для изучения вирулентности Clostridium Perfringens перевязаны кишечной петли

Здесь мы представляем протокол к хирургическим путем создания «кишечной петли перевязаны» в курица тонкий кишечник. Эта процедура позволяет для сравнения нескольких штаммов Clostridium perfringens вирулентности в situ в одном узле. Этот метод значительно уменьшается количество кур, обычно необходимых для подобных экспериментов в естественных условиях .

Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области исследования куриного некротического энтерита. Такие, как сравнение вирулентности конкретных Clostridium perfringens штаммов, вызывающих это заболевание. Основным преимуществом этой техники является то, что она значительно сокращает количество кур, обычно необходимых для подобных амбиворных экспериментов.

Хотя этот метод может дать представление о потенциале вирулентности штаммов Clostridium perfringens, он также может быть применен к другим кишечным патогенам, таким как Clostridium difficile, или Salmonella enterica. Как правило, лица, новые для этого метода будет бороться, потому что хирургические процедуры нуждается в конкретной подготовке и должны выполняться только теми, кто приобрел навыки, такие как завасывания, методы до эксперимента. После обеззавкиив 10-недельного специфического патогена свободной leghorn курица, настроить мониторы для жизненно важных измерений и начать вручную удаления перьев из живота нежной тяги.

Затем скраб хирургического сайта с помощью хлоргексидина глюконат с мягкой щеткой щетины. Аккуратно скраб кожи от центра до периферии в течение пяти минут без обращения курса. Затем выполните три чередующихся прохода на хирургическом участке с глюконатным раствором хлоргексидина и изопропиловым спиртом с использованием стерильных марлей.

Опять же, перейдите из центра на периферию, а затем, драпировка курица. Начните с открытия драпировки над хирургическим участком, затем сделайте L-образный разрез кожи средней линии с скальпелем номер три, начиная один сантиметр прижиматься к грудине, и заканчивая одним сантиметром черепа к клоиче. Далее, продолжить L-образный разрез перпендикулярно первому, делая второй разрез, начиная с обниматься конце первого разреза и продолжать пять сантиметров в левую сторону живота, следуя линии таза.

Это отверстие позволит легко экстракции кишечника. Затем откройте брюшной полости и брюшной мышцы, используя тот же L-образный узор для доступа к брюшной полости. Воздушные мешки теперь будут подвергаться воздействию и должны быть влажными с использованием солевой пропитанной марли.

Затем вставьте крючок Snook spay в брюшную полость, следуя за левой брюшной стенкой и работая крючком вокруг брюшных воздушных мешков для извлечения кишечника. Затем, используя сухую марлю, продолжайте мягко экстерьеризации кишечника подвергать Jejunum. Распространение кишечника и держать их влажными с частым распыления с солевым раствором и, покрывая их солевой пропитанной марлей.

Важно быть очень мягким при выемки кишечника, потому что чрезмерное напряжение может разорвать мезентерических сосудов, которые могут привести к кишечным ишемических поражений и значительно поставить под угрозу исход процедуры. После экстерьеризации кишечника, сделать серию петель в кишечнике, начиная с Jejunum. Каждая петля может быть использована для различного лечения.

В проксимальной Jejunum, место простой лигатуры с полиглутамин Multifilament синтетического абсорбируемого материала, избегая при этом лигатуры основных мезентерических сосудов. Затем поместите дистальную лигатуру в двух сантиметрах от проксимальной лигатуры, чтобы завершить первый цикл. Все проксимальные и дистальные лигатуры должны быть размыты примерно на два сантиметра.

Каждая пара лигатур составляет петлю, которая является герметичным сегментом. Затем создайте интерлуп или сегмент кишечника между петлями. Поместите простую лигатуру на пол-сантиметра к дистальной лигатуре первого цикла.

Эта лигатура находится в середине интерлупа и уменьшит возможное перекрестное загрязнение между петлями. Теперь, продолжить шаблон создания еще один цикл пол-сантиметра aborely от интерлуп лигатуры. Здесь создаются девять петель и восемь интерлуп, покрывающих 26 сантиметров кишечника.

Количество петель можно регулировать по мере необходимости. Далее, приступить к инъекционным штаммом Clostridium perfringens в петли. В анти-мезентерической стороне петли, используйте 26 калибровочных иглы под углом 45 градусов, чтобы придать 0,2 миллилитров раствора BHI, содержащий один миллион колоний формирования единиц бактерий в фазе роста midlog.

В этой ситуации, с девятью петлями, пять различных штаммов вводятся в чередующиеся петли с промежуточными петлями, введенными с транспортным средством в одиночку в качестве отрицательного контроля. После введения патогенных микроорганизмов, аккуратно замените желудочно-кишечный тракт на спинную область брюшной полости под воздушными мешками. Затем закройте брюшную полость.

Шов брюшной политонея и брюшной мышцы вдоль таза с простой непрерывной шовной картины с использованием полиглутамина Multifilament синтетический абсорбируемый материал. Продолжить, зашив брюшной полости и брюшной мышцы от грудины до cloiche с помощью простых непрерывных швов. Далее, шов кожи близко с помощью полиглутамина Multifilament синтетический материал и простой непрерывный узор.

Сначала шов вдоль таза, затем шов от грудины до клоиша. После закрытия разрезов, держать курицу под общим наркозом при правильном использовании анальгетиков, чтобы свести к минимуму боль животных во время инфекции. Продолжить анестезиологический мониторинг, чтобы обеспечить адекватный уровень анестезии.

После желаемого количества инфекционного времени, например, семи часов в настоящем эксперименте, усылайте птицу и соберите кишечные ткани. Используя скальпель номер три, вырежьте секцию петли от половины до одного сантиметра. Затем перенесите секцию на 10% Формалина для ночной фиксации и дальнейшего гистопатологического анализа.

Затем используйте тот же лезвие скальпеля на той же петле, чтобы вырезать оставшуюся часть петли и перенести эту ткань в микросовеленную трубку для изоляции бактерий. Повторяйте эту процедуру для каждого цикла, используя новое лезвие скальпеля каждый раз. Через семь часов после инъекции кишечная петля, вводимая контрольно-стерильной средой, имеет нетронутую слизистую щетку без некроза.

Мягкие заторы в кишечных слоях сегментов не редкость. Через семь часов после инъекции с патогеном, Clostridium perfringens, вилли советы размываются с некротических входных участков, окружающих советы. А потом некротический материал, окружающий вилли, есть скопления крупных бактерий в форме стержня.

Иногда некроз из-за плохого процедурного исполнения и может быть неправильно истолкован как поражения, производимые бактериями. Явным признаком является отсутствие бактерий в гистологическом разделе. Кроме того, кровеносные сосуды в мышечном слое сильно расширены накоплением многих вырождающихся эритроцитов, указывающих на сосудистые заторы.

Это было вызвано лигатированных мезентерических кровеносных сосудов, которые, вероятно, были лигатированы, чтобы сделать чрезмерную физическую нагрузку на кишечник. Ишемические петли можно легко определить микроскопически во время хирургических процедур. После тяжелых сосудистых заторов через несколько минут после лигатуры, сероза будет темно-синий вместо его нормальной розовой красноватой окраски.

После просмотра этого видео, вы должны иметь хорошее понимание того, как создать несколько кишечных петель в модели курицы, поместив лигатуры на кишечнике. После освоения хирургических процедур, за исключением времени инфекции, может быть сделано менее чем за три часа, если она выполняется должным образом. При попытке этой процедуры, важно помнить, чтобы держать курицу под глубокой анестезией, чтобы контролировать боль и контролировать жизненно важные признаки во время всех процедур, в том числе хирургической части и после инфекции времени.

После этой процедуры или их методы, такие как бактериальная изоляция, и прямой идентификации, такие как обнаружение генов ПЦР может быть выполнена для того, чтобы ответить на внешние вопросы, такие как восстановление и идентификация первоначального вводили патогена. После этого развития, этот метод проложил путь для исследователей в области Clostridium perfringens патогенеза для изучения некротического энтерита у кур. Не забывайте, что работа с живыми животными может быть чрезвычайно переменной.

И меры предосторожности, такие как непрерывный анестетический мониторинг курицы всегда должно быть сделано при выполнении этой процедуры.