Завод инфекции тест: Спрей и Рана опосредованной прививка с завода возбудителя Magnaporthe мурены

Это видео может помочь обучить ключевым методам в области заражения растений, таким как бесплатная и желательная опосредованная инокуляция патогеном растений Magnaporthe grisea. Основное преимущество этого метода заключается в том, что протокол распыления, ранения способствует быстрому, точному и широкомасштабному скринингу патогенных типов изолятов грибов. Применение этого метода связано с изучением физиологии для борьбы с патогенами растений, поскольку он очень важен для профилактики и контроля крупномасштабных болезней растений.

Этот метод может дать представление о механизме консервации патогенов у грибов. Его также можно применять к основному разнообразию сельскохозяйственных растений, таких как рис или ячмень. Как правило, люди, плохо знакомые с этим методом, испытывают трудности, потому что трудно аккуратно соскрести конидии стерильными ватными палочками.

Демонстрация этого метода имеет решающее значение, так как сбор соскобливающих ран без проникновения в листья, так как основным средством отделить листья риса или ячменя затруднительно. Для начала взвесьте от 30 до 50 грамм овсяных хлопьев. Добавьте овсяные хлопья в 800 миллилитров дистиллированной деионизированной воды и прокипятите смесь в течение 30 минут в электрической кастрюле.

Далее процедите отваренную овсяную смесь через кусочек марли в стакан. Затем добавьте в стакан 150 миллилитров томатного сока и 20 грамм агара. Добавьте в стакан дистиллированную деионизированную воду до 1000 миллилитров.

Замочите около 50 семян риса в дистиллированной деионизированной воде на 3 дня, затем заверните семена во смоченную марлю и прорастите их на влажной фильтровальной бумаге в чашках Петри. Далее высадите рассаду в горшки с автоклавным горшечным грунтом. После полива рассаду накройте ее слоем вермикулита.

Поместите рассаду в стеклянный дом, поддерживаемый при температуре 25 градусов Цельсия, в течение одной-двух недель. Далее с помощью стерильных хирургических ножниц разрежьте три слоя фильтровальной бумаги на восьмисантиметровые круги. Поместите кружочки фильтровальной бумаги на 100-миллиметровые стерильные пластиковые пластины.

Добавьте в каждую посуду ровно столько дистиллированной деионизированной воды, сколько нужно, чтобы пропитать фильтровальную бумагу. Затем поместите две стерильные зубочистки на расстоянии двух-трех сантиметров друг от друга в каждую чашку для культуры. Через две недели после посева собирают листья растений риса, срезая нижнюю часть стебля.

Используя культуру в термостатическом инкубаторе, M.grisea процеживает на планшетах OTA при температуре 25 градусов Цельсия в течение четырех дней. Затем с помощью пипетки добавьте по два миллилитра дистиллированной деионизированной воды на каждую пластину. С помощью петли инокуляции соскребите мицелий с дикого типа и мутантных штаммов в остатки мицелия.

Соберите остатки мицелия и перенесите их на новую ОТА-планшет. Затем высушите остатки мицелия на чистой скамейке. Добавьте два миллилитра дистиллированной деионизированной воды в чашку для культивируемого мицелия и с помощью стерильного ватного тампона аккуратно соскребите конидии.

Отфильтруйте суспензию конидии через два слоя линзовой бумаги и переложите суспензию в новую 50-миллиметровую трубку. Затем центрифугируйте пробирку в течение пяти минут при 5000 умноженных на избление. После центрифугирования надосадочную жидкость удалить надосадочную жидкость и повторно суспендировать гранулу раствором Твин-20, в результате чего концентрация составит 20 000 конидий на миллилитр.

Налейте суспензию в ручной распылитель, затем распылите примерно 10 миллилитров конидиальной суспензии на листья двухнедельных растений риса. Опрыскайте листья контрольных растений раствором Твин-20. После этого выдержите листья в темной влажной коробке в течение 24 часов.

Далее перенесите листья во влажную камеру с люминесцентным светом на 12 часов. С помощью анатомической иглы соскребите три раны длиной два-три сантиметра в главных жилках отделившихся листьев риса. Насадите соскобленные листья на зубочистки и опрыскайте их раствором Твин-20.

Затем вырежьте мицелиальную пробку размером пол-полусантиметра из ОТА-планшетов, содержащих каждый штамм M.grisea. Поместите пробки на раненые листья и инкубируйте их во влажной камере при температуре 25 градусов Цельсия в течение трех-восьми дней. После инкубационного периода исследуйте и оценивайте поражения в соответствии с системой подсчета баллов, предоставленной Международным научно-исследовательским институтом риса.

Наконец, сфотографируйте больные листья, чтобы оценить заразность тестируемых сортов. В соответствии с этим протоколом на восприимчивых проростках риса проводились анализы на инфекцию растений с использованием штаммов M.grisea P131 и Com1. На инокулированных листьях дикого типа P131 наблюдались типичные сильные поражения от взрыва риса.

Тем не менее, инокулированные листья Com1 показали явные дефекты инфекции и не вызвали полной инфекции. Чтобы определить, может ли M. grisea заражать клетки хозяина через раны, стертые листья диких растений инокулировали мицелиальными пробками или конидиальными каплями. Привитые из распыления листья не показали никаких инфекционных дефектов.

Напротив, листья, инокулированные через мицелиальные пробки, имели явные дефекты. При выполнении этой процедуры важно соскоблить три раны длиной два-три сантиметра в основных жилках отделившихся листьев риса. После этой процедуры могут быть выполнены другие методы, такие как инокуляция патогенов, для выявления и анализа устойчивости сельскохозяйственных культур к болезням

После своего развития этот метод открывает путь исследователям в области патогенов растений к изучению болезни риса в современных организмах. Не забывайте, что работа с Magnaporthe grisea может быть опасной, и при выполнении этих процедур всегда следует соблюдать меры предосторожности, такие как ношение перчаток.