Высоким разрешением сравнение частот бактериальных спряжение

Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области микробиологии о том, как часто плазмидная ДНК может распространяться среди различных бактерий. Основным преимуществом этого метода является то, что, уменьшая фон, мы можем обнаружить небольшие различия в частоте спряжения с высоким разрешением. Демонстрацией процедуры будет Косукэ Янагия, аспирант моей лаборатории.

Чтобы вычислить частоту спряжения по наиболее вероятному числу, фильтр мат один миллилитр от ночной донорской культуры с одним миллилитром от ночной культуры получателя в течение 45 минут при 30 градусах по Цельсию, как только что продемонстрировано. В то время как ко-культура инкубации, последовательно разбавить оригинальные доноров и реципиентов культур для покрытия в трижды на донора бульона Лурия, или LB, а также канамицин, или получатель LB плюс гентамицин пластин для двухдневной культуры на 30 градусов по Цельсию. В конце инкубации, повторное производство культуры на фильтре в стерильных LB, содержащих канамицин и гентамицин для последовательного разбавления в 96-хорошо клеточной культуры пластины в четыре раза.