Характеристика тимус зависимых и тимус независимые иммуноглобулина изотипа ответов в мышей, используя энзим соединенный Assay иммуносорбента

Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области иммунологии об иммунизации, индуцированной антигенами, зависимых и независимых ответах антител, а также об активации В-клеток и реакциях зародышевого центра. Основное преимущество этой методики заключается в том, что она обеспечивает надежные и количественные измерения ответа изотипа Ig с прямым сравнением активации В-клеток и гуморального иммунитета у мышей. Для иммунизации ТНП-полисахаридами загрузите в один миллилитровый инсулиновый шприц на каждую мышь 100 микролитров свежеприготовленного раствора антигена и введите иглу в нижний правый квадрант каждого животного под углом примерно 30 градусов, чтобы избежать инъекции нижнего органа.

Когда все мыши будут введены инъекции, верните животных в клетки для содержания в определенном учреждении, свободном от патогенов. В соответствующие экспериментальные точки соберите от 150 до 200 микролитров крови от каждого иммунизированного животного с помощью ретроорбитального кровотечения и дайте образцам свернуться при комнатной температуре в течение одного-двух часов. В конце инкубации центрифугируйте коагулированные образцы крови и переведите прозрачную сыворотку из верхней части каждого сгустка крови в стерильную микроцентрифужную пробирку объемом 1,5 миллилитров.