Частые проб крови кончик хвоста у мышей для оценки пульсирующего лютеинизирующего гормона

Общей целью частого забора крови с кончика хвоста является получение образцов цельной крови для измерения секреции пульсирующего лютеинизирующего гормона, называемого ЛГ, у бодрствующих мышей без анестезии и нормально себя ведущих. Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области репродуктивной нейроэндохринологии, предоставляя надежный протокол для оценки пульсирующей секреции лютеинизирующего гормона у мышей. Основное преимущество этого метода заключается в том, что частое обращение и привыкание обеспечат надежные и надежные измерения пульса лютеинизирующего гормона после острого или хронического экспериментального лечения.

В течение пяти недель до сбора крови обрабатывайте мышей ежедневно с понедельника по пятницу. В последние две недели занимайтесь мышами также в субботу и воскресенье. Выполняйте режим работы с мышью в шкафу биобезопасности.

Извлеките первую мышь из клетки и поместите ее на подходящую поверхность в корпусе. Аккуратно зафиксируйте мышь на этой поверхности, придерживая основание ее хвоста. Затем другой рукой крепко погладьте брюшную поверхность хвоста от основания к кончику.

Проделайте это в общей сложности шесть раз, а затем верните мышь в клетку. Это один набор обработок. Теперь подождите шесть минут и выполните еще один подход к обработке.

Продолжая эту схему с интервалами между множествами, выполните четыре подхода обработки за сеанс обработки. В общей сложности это обеспечивает двадцать четыре хвостовых гребка за сеанс. Если экспериментальные методы лечения в течение периода отбора проб будут включать в себя какие-либо дополнительные методы обработки, такие как загривка или внутрибрюшинная инъекция, то мышей также акклиматизируют к такой активности во время сеансов обработки.

За две недели до запланированного дня забора крови разместите мышей парами, чтобы свести к минимуму их прерывание во время периода забора проб. Для забора крови подготовьте микроцентрифужные пробирки объемом 0,6 миллилитра для хранения крови. Наклейте на пробирки маркировку и на три микролитра крови для сбора крови нанесите аликвоту пятьдесят семь микролитров буфера ACES в каждую пробирку.

После приготовления храните пробирки при температуре четыре градуса Цельсия. В шкафу биобезопасности должны быть наготове следующие предметы: наконечники для пипетки, мусорное ведро, таймер, журнал для исследований, ведро со льдом с пробирками для сбора крови, острые стерильные ножницы, перманентный маркер и маленькая марля. За сорок пять минут до начала сбора крови извлеките первую мышь из клетки и поместите ее на подходящую поверхность.

Затем отметьте хвост, чтобы быстро отличить эту мышь от ее партнера по клетке. Теперь с помощью ножниц удалите один-два миллиметра кончика хвоста. После обрезания хвоста осторожно поглаживайте хвост до тех пор, пока на кончике не образуется капля крови.

Затем соберите три микролитра крови и выбросьте кровь и наконечник в мусорное ведро. Далее убедитесь, что кровоток прекратился. При необходимости слегка надавите стерильной марлей.

Затем верните мышь в клетку на шесть минут. Теперь с интервалом в шесть минут в течение сорока пяти минут сильно поглаживайте хвост, чтобы взять дополнительные образцы крови у мыши. Если капля крови не образуется, промокните хвост марлевой салфеткой, смоченной в физрастворе, чтобы помочь очистить сгусток крови.

В период предварительного отбора проб отбракуйте все аликвоты крови. Через сорок пять минут начинается период отбора проб. При взятии проб перелейте три микролитра крови в пробирку для сбора, перемешайте пробирку путем инверсии и положите ее обратно на лед.

Теперь продолжайте отбор проб столько, сколько необходимо. После этого либо усыпьте мышей, либо убедитесь, что кровоток из их хвоста полностью остановился, а затем предоставьте мышам чистую клетку. Затем переложите образцы крови в ящик для хранения и храните образцы при температуре минус двадцать градусов по Цельсию до тех пор, пока их можно будет проанализировать.

Лютеинизирующий гормон или ЛГ измеряли в частых образцах крови для определения реакции на острый психосоциальный стресс. Взрослым самкам C57 из шести черных мышей была проведена овариэктомия и взяты образцы крови в течение девяноста минут, чтобы установить исходный уровень пульсирующей секреции ЛГ перед лечением. Для обработки стресса в течение девяноста минут отбора проб экспериментальные животные были помещены в устройства для удержания грызунов и переведены в новую клетку, в то время как контрольная группа оставалась в своих домашних клетках и не была ограничена.

Анализ показал, что контрольные животные имели четкие однозначные импульсы ЛГ на протяжении всего периода отбора проб. Напротив, психосоциальный стресс от ограничения быстро и однозначно подавлял пульсирующую секрецию ЛГ в экспериментальной группе. При подготовке к использованию этого метода важно помнить о минимизации помех окружающей среды, таких как шум или помехи со стороны других исследователей, которые могут вызвать стресс у мышей и прервать пульсирующую секрецию ЛГ.

С момента своего развития доктором Штейном и другими сотрудниками лаборатории Чена этот метод начал прокладывать путь исследователям в области нейроэндокринологии к изучению регуляции пульса ЛГ у видов, где сложные молекулярные и генетические инструменты практичны и доступны.