Масс-спектрометрия спрей лист: Быстрое окружающего ионизации техника непосредственно оценить метаболитов из растительных тканей

Опрыскивание листьев MS – это быстрый метод качественного и полуколичественного анализа неповрежденных тканей растений, который имеет широкий спектр применения. Основное преимущество этого метода заключается в том, что растительные ткани могут быть проанализированы напрямую, практически без подготовки образцов. Хотя этот метод дает хорошее представление о мезембриновых алкалоидах из Sceletium, он также может быть использован для анализа различных других видов растений и экзогенных химических веществ, таких как пестициды.

Люди, плохо знакомые с этим методом, могут столкнуться с этой задачей, потому что необходимо оптимизировать протокол для каждого вида растений, типа ткани и соединения, представляющего интерес. Используйте модифицированный нано-источник для распыления листьев MS.As для распыления листьев не требуются жидкие компоненты, измените источник, удалив жидкий хроматографический зонд из источника. Масс-спектрометрический провод для листового распыления, который будет подавать напряжение на ткань растения, имеет штифт, который был припаян к проводу на одном конце, и зажим, который был припаян на другом конце.

Если система использовалась недавно, дайте ей остыть на ощупь, прежде чем удалять любой альтернативный источник в конусе щетки. Затем прикрепите нано-распыление листового спрея MS источник. Наконец, создайте файл tune и файл метода, как описано в текстовом протоколе.

Всегда надевайте перчатки и не используйте растительную ткань, которую обрабатывали голыми руками. В противном случае в спектрах будут доминировать загрязняющие ионы, такие как полиэтиленгликоль. Принесите растительные ткани для анализа в ту же комнату, что и система масс-спектрометрии, чтобы обеспечить быстрый отбор проб.

Для растительных тканей, которые не имеют естественно заостренного кончика, используйте лезвие бритвы на предметном стекле, чтобы вырезать конический конец. Нарежьте листья Sceletium tortuosum через 10 недель после всходов на тонкие полоски, каждая из которых имеет конический конец, чтобы сформировать острие. С помощью щипцов аккуратно выделите растительную ткань на конце, который будет зажат.

Удерживая ткань щипцами, аккуратно перенесите ее на зажим. Отрегулируйте гибкий рычаг и провод с помощью зажима, чтобы расположить ткань на одной линии с входом MS. Обратитесь к тексту для определения оптимального расстояния от ионного отверстия для каждого конкретного масс-спектрометра.

Если первые попытки дают низкую интенсивность сигнала, растительную ткань можно переместить ближе к ионному входу. Загрузите файл метода. Присвойте файлу данных имя и укажите место его хранения.

Затем включите систему MS, нажав кнопку воспроизведения, и нажмите кнопку «Старт», чтобы начать сбор данных. Нанесите растворитель с помощью пипетки с гелевым наконечником, чтобы максимально увеличить расстояние между высоким напряжением и руками пользователя для защиты. Сбор данных до тех пор, пока сигнал сохраняется, или до тех пор, пока не будут собраны адекватные спектры, обычно от 30 до 60 секунд.

Остановите сбор данных и приостановите работу системы MS. После приобретения снимите салфетку и промойте зажим 100% метанолом в безворсовой салфетке. Откройте файл данных и визуально осмотрите хронограмму базовой пиковой массы.

Убедитесь, что интенсивность сигнала составляет примерно от 10 до 500 миллионов. Создайте новый файл метода со списком включений M над Z с точностью до четырех знаков после запятой. Нажмите на глобальные списки и включение.

В разделе Свойства PRM выберите энергию фрагментации и другие параметры тандемной MS. Чтобы получить данные тандемных MS для мезембриновых алкалоидов, фрагментируйте ионы на 276,1583 М над Z, 290,1742 М над Z и 292,1897 М над Z при нормированной энергии столкновения 35. Затем загрузите файл метода tandem MS и именованный файл данных.

Включите систему MS и начните сбор данных, при необходимости добавив растворитель. Когда собраны адекватные спектры, обычно через 30-60 секунд, остановите регистрацию. Выполните анализ данных, как описано в текстовом протоколе.

Представлены репрезентативные результаты метаболического профилирования Sceletium tortuosum с помощью РС-распыления листьев и положительной ионизации со врезкой, отображающей от 260 до 295 М. В Z.In этого исследования было обнаружено в общей сложности девять алкалоидов мезембрина, а также проведена точечная идентификация. Хронограмма массы общего количества ионов при распылении листьев представляет собой успешный эксперимент с распылением листьев MS, в котором стабильный сигнал поддерживался на протяжении всего периода регистрации. Для каждого пика верхнее число - это время в минутах, а нижнее - M over Z. Тандемные масс-спектры были собраны в положительной ионизации, полученной из срезанного листа Sceletium tortuosum с помощью распыления MS. Пунктуальная идентификация алкалоидов проводилась на основе точной массы и фрагментации массы изомеров месембрина М и месембренона М, месембрина и мезембрина М дигидро.

После просмотра этого видео у вас должно сложиться хорошее понимание того, как использовать листовой спрей MS для обнаружения метаболитов растений. Распыление листьев MS используется для обнаружения эндогенных соединений, а также экзогенных соединений, таких как пестициды.