Улитковый имплантат хирургии и записи ответ электрически вызывали слуховой мозга мышей C57BL/6

Модели кохлеарных имплантов могут продвинуть наши знания о технологической основе лечения постоянной сенсорной нервной потери слуха с помощью электрической стимуляции. Этот протокол демонстрирует острую оглушительную и кохлеарную имплантацию в мышь. И функциональная оценка стимуляции кохлеарных имплантов с слуховой реакцией ствола мозга.

Некоторые основные проблемы выполнения кохлеарных имплантов хирургии у мышей являются небольшой размер улитки и наличие большой стапедиальной артерии вблизи круглого окна нишу. Для измерения нормального состояния слуха, загрузить акустическую пену в один миллилитр шприц и ввести от 100 до 200 микролитров пены в контралатеральный ушной канал анестезированной восемь-двенадцать недель C57 черный 6 мыши, чтобы изолировать слуховой мозг стволовых ответ от ипсилатерального уха, заботясь о том, чтобы шприц уплотнения близко к уху для доставки пены всю дорогу в ушной канал. Затем поместите динамик в 10 сантиметров от ипсилатерального уха и очистите электроды aVR 70%этанолом.

Поместите эталонный электрод под кожу ниже пинна ипсилатерального уха и активный электрод под кожей вершины. Положите наземный электрод под кожу задней ноги. Подключите головной сцену и предустановку к слуховому процессору через порт оптического волокна.

И проверьте неуступляемость активных и эталонных электродов. Когда электроды отображают тот же импульс, закройте звуконепроницаемый стенд и представить кнопку стимуляции. Запись AVR в свободном состоянии поля с соответствующим сложным слуховым процессором и программным обеспечением.

Стандартизация нажмите стимул 0,1 миллисекунды одного канала монофазных кликов, представленных на 21 герц с уменьшением уровня кликов от 90 децибел уровня звукового давления до 10 децибел уровня звукового давления в 10 децибел шаги в 10 миллисекундного окна записи. Затем определите порог aVR как самый низкий уровень децибел с узнаваемой волновой реакцией aVR. Чтобы вызвать оглушительный, поместите мышь на правой стороне заботясь, чтобы держать тело прямо так дыхательные пути остаются открытыми.

Удалите мех за ипсилатеральным ухом и дезинфицировать обезвреженное кожу последовательным раствором этанола 70%и скрабами Povidone-Iodine Solution Scrubs. Перемести животное под рассекающий микроскоп и используйте 16-ти раз объектив и скальпель, чтобы сделать один-полтора сантиметра постаурного разреза. Под 25 до 40x увеличение, использовать миппы, чтобы тупой вскрыть через открытый подкожный слой жира и втягивать стерноклидомастоидной мышцы, чтобы выявить тимпанический булла periosteum.

Лицевой нерв обертывания вокруг задней спинной край грудиклеидомастоидной мышцы и работает rostrally вдоль ушного канала к пинне. Использование лицевого нерва в качестве ориентира для идентификации слуховой буллы аккуратно поместите самоутвергающий инструмент ретрактора в разрез для доступа к булле. Удалите ткань, перевесив медиодорную область буллы, чтобы дать можно было четко визуализировать хребет между буллой и мастоидным процессом и нежно повернуть 30 гуаговую иглу в буллу, чтобы создать отверстие на задней верхней стороне хребта.

Pinch мелкие кусочки кости с тонкой наконечником щипцы, чтобы расширить булластомию до тех пор, пока полость среднего уха подвергается. И продлить отверстие dorsally к мастоидного процесса до тех пор, пока круглая ниша окна очищается от чрезмерной кости. Наиболее важным шагом является подготовка оконной ниши.

Не забудьте взять свое время, чтобы не повредить стапедиальной артерии. Заботьтесь о том, чтобы не повредить стапедиальную артерию, расширьте булластомию в передней верхней стороне, чтобы визуализировать стапы, кость среднего уха, соединенную с овальным окном. Затем удалите стапы, чтобы разоблачить овальное окно.

Чтобы применить ототоксический агент, используйте притупленный 30 guage иглы мягко перфорировать круглые и овальные мембраны окна, подтверждая, что перилимф иссякнут. И использовать один миллилитр шприц оснащен 30 калибровочных иглы медленно perfuse 0,2 миллилитров 5%weight по объему неомицин растворяется в PBS через овальное окно. Когда весь объем агента был доставлен обильное решение в круглое окно, заботясь, чтобы не повредить структуры оконной кости.

И поместите один квадратный миллиметр кусочки губчатого пропитанной неомицина в круглое окно и овальное окно нишу. Затем снимите втягивающий и закройте разрез, записав пост-оглушительный акустический AVR, как это было продемонстрировано через 30 минут. Чтобы вставить электродный массив кохлеарного импланта, поместите инструмент ретрактора обратно в разрез, чтобы повторно получить доступ к булле и вставить электродный массив в scala tympani на глубине, так что четвертое платиновое кольцо массива находится прямо внутри круглого окна.

Вставка электродного массива также может быть сложной задачей. Так что не то время, чтобы найти хороший угол вставки с помощью одного инструмента forcep вести провода, а другой вставить массив. Катушка свинцовой проволоки внутри буллы и клей проволоки к ткани над булла.

После тщательного удаления втягивания и закрытия вставки с помощью тканевого клея, используйте scalepel, чтобы сделать 0,5 миллиметра разрез в шее, перпендикулярно линии между тем, где активные и эталонные электроды AVR будет. Поместите молотый шар в вставку и соедините доску электродного массива с платформой стимулятора животных. Для выполнения и электрического AVR, поместите электроды, как ранее продемонстрировано, и откройте программное обеспечение платформы стимулятора животных.

Затем определите парадигму стимуляции электрического импульса и представляем электропозиции, записывающие вызванные электрические реакции aVR непрерывно через headstage TBT, преамплификатор и слуховой процессор. Пред- и послеоперационные пороги слуха служат функциональным считыванием оглушительной процедуры. Актуальное применение 5%neomycin к овальным и круглым окнам значительно увеличивает нажатые вызванные пороги слуха.

Электрическая стимуляция интракохлеарный электрод пост оглушительный может надежно генерировать электрическую активность AVR. В некоторых случаях стимуляция кохлеарных имплантов активирует лицевой нерв и производит высокую амплитудную волну с короткой задержкой, характеризующейся быстрым усилением Волны III около трех миллисекунд и, вероятно, прямой реакцией лицевого нерва, или длительной задержкой, которая появляется около пяти-шести миллисекунд и, вероятно, будет не слуховой миогенной реакцией , ссылается косвенно лицевого нерва. В этом исследовании мы показали, что модель кохлеарного импланта мыши осуществима и кохлеарный имплант мал и операция: сложно.

При попытке этой процедуры, важно рассмотреть оглушительный протокол для устранения любых электрофонических ответов в записи AVR и имитировать потерю волос клеток найти в большинстве пользователей C.I.. Таким образом, растущее число генетических моделей глухоты человека и биомедицинских инструментов, доступных у мышей, делает нас привлекательной моделью животных для исследования инструментов, в том числе для кохлеарных имплантов.