Определение активности фосфолипазы C в мозг огневки от пчелы
14 сентября 2018 г.
Чтобы проверить тормозящее действие фармакологических агентов на фосфолипаза C (PLC) в различных регионах мозга пчелы, мы представляем биохимического анализа для измерения активности PLC в этих регионах. Этот assay может быть полезным для сравнения PLC активность тканей, а также среди пчел, экспонирование различных поведений.
Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области неврологии, такие как ли и как PLC деятельности в различных областях мозга участвуют в функции мозга медоносных пчел. Основным преимуществом этого метода является то, что исследователи могут легко предварительно провести эксперимент со стандартными лабораторными помещениями, так как этот протокол требует только базовых манипуляций. Для начала поместите 50 мл трубки, содержащей медоносных пчел на льду в течение 30 минут, чтобы анестезировать пчел. Затем подготовьтесь к этапу вскрытия, сложив кусок зубного воска пополам и поместив его в пластиковую тарелку. Под бинокулярным микроскопом используйте пинцет, чтобы отделить голову пчелы от ее тела. Затем зафиксните голову на зубном воске и вставьте булавки насекомых у основания каждой антенны, чтобы удерживать внутреннюю часть головы в восходящем положении. Далее, залить достаточно солевого раствора над головой, чтобы покрыть его. С помощью пинцета удалить антенну. После этого используйте скальпель, чтобы сделать горизонтальный разрез вблизи основания антенны и продольный разрез на границе сложных глаз. Сделать горизонтальный разрез в верхней части головы и удалить кутикулу, чтобы открыть окно над мозгом. Далее используйте пинцет, чтобы удалить ретин глаз из ококлы и трахе с внутренней поверхности мозга. Затем вставьте пинцет прямо под кутикулу глаза, чтобы удалить соединительной ткани между кутикулой сложных глаз и ретин глаза. После этого удалите кутикулу и отретин глаза сложных глаз. Затем используйте пинцет, чтобы тщательно удалить оставшийся траш с внутренней поверхности мозга. Затем вырежьте соединительной ткани между мозгом и вокруг тканей и вскрыть мозг из головы капсулы. Используя пинцет, очистить траш от задней поверхности мозга. Затем используйте скальпель, чтобы сократить связь между грибными телами или МБ и другими областями мозга рядом с вертикальными долями. Поместите вскрытые MBs и любые оставшиеся ткани мозга в 1,5 мл труб и заморозить их быстро с сухим льдом. Во-первых, добавьте 10 мл буфера гомогенизации в замороженную ткань мозга. Используйте пластиковую песель, чтобы вручную гомогенизировать ткани в 1,5 мл трубки. После этого перенесите раствор гомогенизированной ткани в следующую ткань в партии и повторите процесс гомогенизации. Затем добавьте 30
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео
Обзор
В данном исследовании представлен биохимический анализ, предназначенный для измерения активности фосфолипазы C (PLC) в различных отделах головного мозга медоносной пчелы. Целью анализа является упрощение сравнения активности PLC в различных тканях и между пчелами с разным типом поведения.
Основные компоненты исследования
Область науки
- Нейронаука
- Биохимия
- Поведенческая биология
Теоретические основы
- Фосфолипаза C (PLC) играет ключевую роль в клеточной сигнализации.
- Понимание активности PLC может дать представление о функциях мозга и поведении.
- Медоносные пчелы служат модельным организмом для изучения нейробиологических процессов.
- Сравнительные исследования могут выявить, как различные формы поведения влияют на активность PLC.
Цель исследования
- Разработать надежный метод анализа для измерения активности PLC в областях мозга медоносной пчелы.
- Сравнить активность PLC в различных тканях.
- Исследовать взаимосвязь между активностью PLC и поведением пчел.
Используемые методы
- Разработка биохимического анализа для измерения активности PLC.
- Сбор образцов из различных областей мозга медоносных пчел.
- Количественный анализ уровней активности PLC.
- Поведенческие тесты медоносных пчел для корреляции с активностью PLC.
Основные результаты
- Успешное измерение активности PLC в различных областях мозга.
- Были отмечены различия в активности PLC у пчел с разным поведением.
- Метод анализа продемонстрировал надежность для проведения сравнительных исследований.
- Полученные данные указывают на связь между активностью PLC и поведенческими различиями.
Выводы
- Разработанный метод анализа является ценным инструментом для нейробиологических исследований.
- Понимание активности PLC может расширить знания о поведении пчел.
- Будущие исследования могут быть направлены на изучение роли активности PLC у других видов.
Часто задаваемые вопросы
Значимость для отрасли
Количественное определение активности фосфолипазы C (PLC) в отдельных областях мозга позволяет снизить риски при проверке гипотез о механизмах нейронной сигнализации в модельных системах. Данный рабочий процесс способствует валидации мишеней на ранних этапах, связывая биохимическую активность со специфическими функциями отделов мозга, что обеспечивает трансляционную преемственность от молекулярных до поведенческих фенотипов. Этот подход представляет собой масштабируемую нерадиоактивную аналитическую платформу для сравнительной нейробиологии и фармакологических исследований.
Стратегическое применение в биофармацевтических исследованиях и разработках
Ранний поиск и валидация мишени
- Позволяет исследовать PLC как функциональную мишень в нейронных цепях, связанных с поведением.
- Способствует снижению биологических рисков путем количественного определения активности фермента в различных областях мозга.
- Повышает прогностическую уверенность при установлении связи между молекулярными мишенями и фенотипами высшего порядка.
Скрининг и разработка анализа
- Предлагает валидированную флуорогенную систему анализа для измерения активности PLC в гомогенатах тканей.
- Обеспечивает воспроизводимое количественное определение фармакологической модуляции активности PLC.
- Поддерживает стандартизацию и масштабируемость анализа для скрининга соединений в нейробиологическом контексте.
Трансляционные и доклинические исследования
- Сопоставляет биохимические показатели с поведенческими фенотипами на модельном организме.
- Обеспечивает преемственность процесса от молекулярных открытий до доклинической валидации нейрональных мишеней.
- Поддерживает продвижение нейроактивных соединений с учетом рисков на основе механистических доказательств.
Интеграция конвейера и рабочего процесса
Данный анализ активности PLC применяется на этапе от раннего поиска до доклинических исследований, что позволяет проводить проверку гипотез и фармакологическую валидацию на моделях нервной ткани.
- Биология открытий: Количественная оценка активности PLC для выяснения роли данного пути в функционировании мозга.
- Скрининг: Обеспечение воспроизводимых количественных результатов для оценки фармакологических агентов.
- Аналитика: Предоставление данных флуоресцентных измерений для прямого сравнения различных областей мозга и условий.
- Трансляционные исследования: Установление связи между молекулярной активностью и поведенческими результатами в модельных системах.
- Применение в широкой практике: Предоставление универсального нерадиоактивного метода анализа для различных нейробиологических исследований.
Операционное и корпоративное воздействие
- Научная ценность: Повышает прогностическую достоверность при валидации нейрональных мишеней и снижении механистических рисков.
- Операционная ценность: Упрощает выполнение анализа за счет использования стандартной лабораторной инфраструктуры и более безопасных реагентов.
- Стратегическая ценность: Улучшает процесс принятия решений о продолжении или прекращении разработки («go/no-go») путем установления связи между биохимической активностью и функциональными результатами.
- Влияние на портфель: Позволяет проводить приоритизацию нейроактивных мишеней и соединений с учетом скорректированных рисков.
Особенности реализации
- Требуется опыт в области нейроанатомии и препарирования тканей для проведения регионального отбора проб.
- Необходим доступ к флуоресцентным планшетным ридерам и стандартным биохимическим реагентам.
- Требуется стандартизация между исследовательскими группами для обеспечения воспроизводимости анализа и сопоставимости данных.
- Методика может быть адаптирована для других модельных систем при условии оптимизации протокола в зависимости от типа ткани.
- Необходимо контролировать возможное влияние эндогенной флуоресценции или поглощения света тканью.
Часто задаваемые вопросы по биофармацевтике
Chapters in this video
0:04
Title
0:39
Dissection of the Honeybee Brain
2:59
Preparation of Brain Homogenates
4:21
PLC Reaction in Brain Homogenates
5:28
Detection of Fluorescence Resulting from PLC Activity
5:56
Results: PLC Activities With and Without PLC Inhibitors in the Mushroom Bodies and Other Brain Regions
7:25
Conclusion
