RESEARCH
Peer reviewed scientific video journal
Video encyclopedia of advanced research methods
Visualizing science through experiment videos
EDUCATION
Video textbooks for undergraduate courses
Visual demonstrations of key scientific experiments
BUSINESS
Video textbooks for business education
OTHERS
Interactive video based quizzes for formative assessments
Products
RESEARCH
JoVE Journal
Peer reviewed scientific video journal
JoVE Encyclopedia of Experiments
Video encyclopedia of advanced research methods
EDUCATION
JoVE Core
Video textbooks for undergraduates
JoVE Science Education
Visual demonstrations of key scientific experiments
JoVE Lab Manual
Videos of experiments for undergraduate lab courses
BUSINESS
JoVE Business
Video textbooks for business education
Solutions
Language
ru_RU
Menu
Menu
Menu
Menu
DOI: 10.3791/58283-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This article presents protocols for using the insect cell and baculovirus protein expression system to produce large quantities of plant secreted proteins for crystallization. The method is advantageous for producing recombinant proteins at a low cost, facilitating structural biology studies.
Здесь мы представляем протоколы для использования насекомых клеток и бакуловирусы системе выражения протеина для производства большого количества белков растений выделяется для кристаллизации белка. Вектор выражения бакуловирусы был изменен с GP67 или насекомое hemolin пептид сигнала для растений секрецию белков в клетках насекомых.
Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области биохимии и структурной биологии секретируемых белков, таких как определение структуры белка, с помощью кристаллографии и крио-ЭМ. Основным преимуществом этой методики является то, что она позволяет получить большое количество рекомбинантных секретируемых белков с относительно низкими затратами на определение структуры белка. Во-первых, синтезируйте фрагмент ДНК, содержащий сайт разрезания BglII с пятью простыми числами, представляющий интерес для сигнала секреции в сайте множественного клонирования, как описано в текстовом протоколе.
Затем расщепите четыре микрограмма ДНК с помощью BglII и X1 и четыре микрограмма экспрессирующей векторной ДНК с помощью BamH1 и X1. Смешайте по 10 единиц каждого фермента рестрикции с ДНК в реакционном буфере с концентрацией 1X. Выдерживать при температуре 37 градусов Цельсия в течение четырех часов. Добавьте 10 микролитров реакционной смеси лигирования, содержащей 1X реакционный буфер T4 DNA Ligase и пять единиц T4 DNA Ligase, в свежую 1,5-миллилитровую пробирку Eppendorf.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Related Videos
13:51
Related Videos
16.7K Views
07:50
Related Videos
51.3K Views
12:18
Related Videos
24.9K Views
23:21
Related Videos
42.5K Views
13:52
Related Videos
23.9K Views
09:11
Related Videos
24.6K Views
12:09
Related Videos
11.4K Views
11:12
Related Videos
13.3K Views
06:11
Related Videos
16.1K Views
08:12
Related Videos
8.9K Views