-1::1
Simple Hit Counter
Skip to content

Products

Solutions

×
×
Sign In

RU

EN - EnglishCN - 简体中文DE - DeutschES - EspañolKR - 한국어IT - ItalianoFR - FrançaisPT - Português do BrasilPL - PolskiHE - עִבְרִיתRU - РусскийJA - 日本語TR - TürkçeAR - العربية
Sign In Start Free Trial

RESEARCH

JoVE Journal

Peer reviewed scientific video journal

Behavior
Biochemistry
Bioengineering
Biology
Cancer Research
Chemistry
Developmental Biology
View All
JoVE Encyclopedia of Experiments

Video encyclopedia of advanced research methods

Biological Techniques
Biology
Cancer Research
Immunology
Neuroscience
Microbiology
JoVE Visualize

Visualizing science through experiment videos

EDUCATION

JoVE Core

Video textbooks for undergraduate courses

Analytical Chemistry
Anatomy and Physiology
Biology
Calculus
Cell Biology
Chemistry
Civil Engineering
Electrical Engineering
View All
JoVE Science Education

Visual demonstrations of key scientific experiments

Advanced Biology
Basic Biology
Chemistry
View All
JoVE Lab Manual

Videos of experiments for undergraduate lab courses

Biology
Chemistry

BUSINESS

JoVE Business

Video textbooks for business education

Accounting
Finance
Macroeconomics
Marketing
Microeconomics

OTHERS

JoVE Quiz

Interactive video based quizzes for formative assessments

Authors

Teaching Faculty

Librarians

K12 Schools

Biopharma

Products

RESEARCH

JoVE Journal

Peer reviewed scientific video journal

JoVE Encyclopedia of Experiments

Video encyclopedia of advanced research methods

JoVE Visualize

Visualizing science through experiment videos

EDUCATION

JoVE Core

Video textbooks for undergraduates

JoVE Science Education

Visual demonstrations of key scientific experiments

JoVE Lab Manual

Videos of experiments for undergraduate lab courses

BUSINESS

JoVE Business

Video textbooks for business education

OTHERS

JoVE Quiz

Interactive video based quizzes for formative assessments

Solutions

Authors
Teaching Faculty
Librarians
K12 Schools
Biopharma

Language

ru_RU

EN

English

CN

简体中文

DE

Deutsch

ES

Español

KR

한국어

IT

Italiano

FR

Français

PT

Português do Brasil

PL

Polski

HE

עִבְרִית

RU

Русский

JA

日本語

TR

Türkçe

AR

العربية

    Menu

    JoVE Journal

    Behavior

    Biochemistry

    Bioengineering

    Biology

    Cancer Research

    Chemistry

    Developmental Biology

    Engineering

    Environment

    Genetics

    Immunology and Infection

    Medicine

    Neuroscience

    Menu

    JoVE Encyclopedia of Experiments

    Biological Techniques

    Biology

    Cancer Research

    Immunology

    Neuroscience

    Microbiology

    Menu

    JoVE Core

    Analytical Chemistry

    Anatomy and Physiology

    Biology

    Calculus

    Cell Biology

    Chemistry

    Civil Engineering

    Electrical Engineering

    Introduction to Psychology

    Mechanical Engineering

    Medical-Surgical Nursing

    View All

    Menu

    JoVE Science Education

    Advanced Biology

    Basic Biology

    Chemistry

    Clinical Skills

    Engineering

    Environmental Sciences

    Physics

    Psychology

    View All

    Menu

    JoVE Lab Manual

    Biology

    Chemistry

    Menu

    JoVE Business

    Accounting

    Finance

    Macroeconomics

    Marketing

    Microeconomics

Start Free Trial
Loading...
Home
JoVE Journal
Biochemistry
Изменение бакуловирусы векторы выражения производить выделяется растительных белков в клетках нас...
Изменение бакуловирусы векторы выражения производить выделяется растительных белков в клетках нас...
JoVE Journal
Biochemistry
A subscription to JoVE is required to view this content.  Sign in or start your free trial.
JoVE Journal Biochemistry
Modifying Baculovirus Expression Vectors to Produce Secreted Plant Proteins in Insect Cells

Изменение бакуловирусы векторы выражения производить выделяется растительных белков в клетках насекомых

Full Text
12,332 Views
09:14 min
August 20, 2018

DOI: 10.3791/58283-v

Sayan Chakraborty1, Krittin Trihemasava1, Guozhou Xu1

1Department of Molecular and Structural Biochemistry, College of Agriculture and Life Sciences,North Carolina State University

AI Banner

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This article presents protocols for using the insect cell and baculovirus protein expression system to produce large quantities of plant secreted proteins for crystallization. The method is advantageous for producing recombinant proteins at a low cost, facilitating structural biology studies.

Key Study Components

Area of Science

  • Biochemistry
  • Structural Biology
  • Protein Crystallization

Background

  • Utilization of insect cells for protein expression.
  • Modification of baculovirus expression vectors.
  • Importance of secreted proteins in structural studies.
  • Cost-effectiveness of the method for large-scale protein production.

Purpose of Study

  • To provide protocols for producing plant secreted proteins.
  • To facilitate protein structure determination through crystallography and cryo-EM.
  • To enhance understanding of secreted protein functions.

Methods Used

  • Synthesis of DNA fragments with specific cutting sites.
  • Digestion of DNA with restriction enzymes.
  • Ligation of DNA fragments to expression vectors.
  • Incubation and transformation into insect cells.

Main Results

  • Successful production of recombinant secreted proteins.
  • Demonstration of low-cost protein expression.
  • Potential for high yields suitable for structural analysis.
  • Protocols validated for reproducibility in research settings.

Conclusions

  • The insect cell and baculovirus system is effective for protein production.
  • This method supports advancements in structural biology.
  • Future applications may enhance understanding of protein functions.

Frequently Asked Questions

What is the main advantage of this protein expression system?
The main advantage is the ability to produce large amounts of recombinant secreted proteins at a relatively low cost.
How does this method contribute to structural biology?
It facilitates the determination of protein structures through techniques like crystallography and cryo-EM.
What are the key steps in the protocol?
Key steps include synthesizing DNA fragments, digesting with restriction enzymes, and ligating to expression vectors.
Can this method be used for any type of protein?
It is specifically designed for plant secreted proteins, but the principles may apply to other proteins as well.
What is the role of the baculovirus in this system?
The baculovirus acts as a vector to facilitate the expression of the target proteins in insect cells.
Is this method widely used in research?
Yes, it is a common method in biochemistry and structural biology for producing proteins for analysis.

Здесь мы представляем протоколы для использования насекомых клеток и бакуловирусы системе выражения протеина для производства большого количества белков растений выделяется для кристаллизации белка. Вектор выражения бакуловирусы был изменен с GP67 или насекомое hemolin пептид сигнала для растений секрецию белков в клетках насекомых.

Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области биохимии и структурной биологии секретируемых белков, таких как определение структуры белка, с помощью кристаллографии и крио-ЭМ. Основным преимуществом этой методики является то, что она позволяет получить большое количество рекомбинантных секретируемых белков с относительно низкими затратами на определение структуры белка. Во-первых, синтезируйте фрагмент ДНК, содержащий сайт разрезания BglII с пятью простыми числами, представляющий интерес для сигнала секреции в сайте множественного клонирования, как описано в текстовом протоколе.

Затем расщепите четыре микрограмма ДНК с помощью BglII и X1 и четыре микрограмма экспрессирующей векторной ДНК с помощью BamH1 и X1. Смешайте по 10 единиц каждого фермента рестрикции с ДНК в реакционном буфере с концентрацией 1X. Выдерживать при температуре 37 градусов Цельсия в течение четырех часов. Добавьте 10 микролитров реакционной смеси лигирования, содержащей 1X реакционный буфер T4 DNA Ligase и пять единиц T4 DNA Ligase, в свежую 1,5-миллилитровую пробирку Eppendorf.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos

Sign In Start Free Trial

Explore More Videos

Биохимия выпуск 138 клетки насекомого бакуловирусы выражение вектор секреторные белка сигнал пептид GP67 hemolin bacmid transfection культуры клеток гликозилирования выражение протеина кристаллизации белка

Related Videos

MultiBac белкового комплекса добывающей платформы на EMBL

13:51

MultiBac белкового комплекса добывающей платформы на EMBL

Related Videos

16.7K Views

Эффективное Агроинфильтрация растений для высокого уровня переходных Экспрессия рекомбинантных белков

07:50

Эффективное Агроинфильтрация растений для высокого уровня переходных Экспрессия рекомбинантных белков

Related Videos

51.3K Views

Выражение функциональных рекомбинантного гемагглютинина и нейраминидазы белков от вируса H7N9 Роман гриппа Используя выражение бакуловирусной системе

12:18

Выражение функциональных рекомбинантного гемагглютинина и нейраминидазы белков от вируса H7N9 Роман гриппа Используя выражение бакуловирусной системе

Related Videos

24.9K Views

Оптимизация и использование Agrobacterium Опосредованного переходных Белок Производство в Nicotiana

23:21

Оптимизация и использование Agrobacterium Опосредованного переходных Белок Производство в Nicotiana

Related Videos

42.5K Views

Эффективное производство и очистка рекомбинантного мышиного Kindlin-3 от клетках насекомых биофизической исследований

13:52

Эффективное производство и очистка рекомбинантного мышиного Kindlin-3 от клетках насекомых биофизической исследований

Related Videos

23.9K Views

Сравнительный анализ рекомбинантного белка слова в разных биофабрик: бактерии, клетках насекомых и растительных систем

09:11

Сравнительный анализ рекомбинантного белка слова в разных биофабрик: бактерии, клетках насекомых и растительных систем

Related Videos

24.6K Views

Кратковременная экспрессия и клеточная локализация рекомбинантных белков в культивируемых клетках насекомых

12:09

Кратковременная экспрессия и клеточная локализация рекомбинантных белков в культивируемых клетках насекомых

Related Videos

11.4K Views

Переходных выражение иностранных генов в клетках насекомых (sf9) для функциональных Assay протеина

11:12

Переходных выражение иностранных генов в клетках насекомых (sf9) для функциональных Assay протеина

Related Videos

13.3K Views

Производства и очистки бакуловирусы для применения генной терапии

06:11

Производства и очистки бакуловирусы для применения генной терапии

Related Videos

16.1K Views

Выражение и очистки от млекопитающих Bestrophin ионных каналов

08:12

Выражение и очистки от млекопитающих Bestrophin ионных каналов

Related Videos

8.9K Views

JoVE logo
Contact Us Recommend to Library
Research
  • JoVE Journal
  • JoVE Encyclopedia of Experiments
  • JoVE Visualize
Business
  • JoVE Business
Education
  • JoVE Core
  • JoVE Science Education
  • JoVE Lab Manual
  • JoVE Quizzes
Solutions
  • Authors
  • Teaching Faculty
  • Librarians
  • K12 Schools
  • Biopharma
About JoVE
  • Overview
  • Leadership
Others
  • JoVE Newsletters
  • JoVE Help Center
  • Blogs
  • JoVE Newsroom
  • Site Maps
Contact Us Recommend to Library
JoVE logo

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. All rights reserved

Privacy Terms of Use Policies
WeChat QR code