Резка и плавающий метод для парафин врезанных тканей для разрезания

Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в морфологической области, такие как парафинообразование. Основное преимущество этой техники заключается в том, что она завершает процедуру резки и складывания и позволяет избежать процесса переноса, который требуется при обычном методе. Для начала соберите все предварительно изготовленные детали в вытяжной шкаф.

Используйте хлороформ, чтобы объединить семь акриловых досок, как показано здесь. Конечным продуктом станет бак, оснащенный секционным каналом и водяной баней. Установите трубчатый электрический нагревательный элемент через отверстие в акриловой доске номер два.

С помощью электродрели проделайте небольшое отверстие в акриловой доске номер семь, и установите на бак цифровой терморегулятор, следя за тем, чтобы он находился хотя бы на один сантиметр ниже уровня предполагаемой водной поверхности, на что указывает черная точка на баке. Перед включением оборудования отрегулируйте напряжение так, чтобы оно было ниже 24 вольт. Извлеките секцию лотка для отходов из микротома.

Затем используйте нейтральный силиконовый герметик, чтобы соединить канал секций с держателем лезвия микротома, следя за тем, чтобы герметик не попал выше верхней части лезвия. Дайте установке высохнуть в течение ночи, чтобы хлороформ и нейтральный силиконовый герметик успели застыть. На следующий день установите лезвие в держатель лезвия.

Добавьте воду на водяную баню, следя за тем, чтобы поверхность воды касалась только верхней части лопасти. После выполнения обычной парафиновой резки включите оборудование, чтобы начать улучшенную парафиновую секцию. Используйте переключатель определения температуры, чтобы открыть обогреватель.

Установите целевую температуру в диапазоне от 38 до 40 градусов Цельсия на один час, чтобы нагреть воду. С помощью ножа измените парафиновый блок, полученный при заделке парафина. Затем поместите блок на кассетный зажим микротома и зафиксируйте его.

Обрежьте более толстые срезы, чтобы быстрее подойти к образцу. Отрегулируйте толщину профиля до подходящей для образцов. Поворот маховика автоматически загрузит секции в секции, канал и ванну.

Затем разрежьте образец медленным и равномерным режущим ходом. Направьте секции в камеру ванны так, чтобы они плавали в линию. Если головная часть прилегает к стенке камеры, используйте направляющую щетки, чтобы она оставалась в плавучем положении.

После того как срезы полностью развернутся на водяной бане, с помощью пинцета отделите несколько, а затем поднимите их на предметное стекло микроскопа. Перенесите горки в духовку, установленную при температуре 42 градуса Цельсия, чтобы высохнуть на ночь. Затем предметные стекла можно хранить при комнатной температуре в течение неопределенного времени до тех пор, пока они не будут готовы к анализу.

Когда анализ будет готов, используйте окрашивание гематоксилин-эозином для оценки срезов с использованием усовершенствованного метода. В этом исследовании используется усовершенствованный метод подготовки парафиновых срезов для тканей гиппокампа взрослых мышей, почек взрослых мышей, эмбрионального мозга мышей и глаз рыбок данио. Как показано на рисунке, новый метод позволяет избежать потери сечений и увеличивает долю интактных участков в каждом типе исследуемой ткани.

При выполнении целосерийного секционирования этот метод ускоряет скорость секционирования парафина во всех испытуемых образцах. Другими словами, этот метод обеспечивает более высокое качество срезания парафина за меньшее время, чем обычный метод. Затем наблюдаются серийные срезы сетчатки зрительного нерва данио-рерио путем окрашивания гематоксилин-эозином.

Видно, что срезы, собранные с помощью усовершенствованного метода, имеют лучшую целостность, чем срезы, собранные с помощью традиционного метода срезания парафина. Несмотря на то, что при сравнении этих двух методов нет существенных различий в качестве большинства убранных участков, некоторые срезы, собранные традиционным методом, имеют относительно низкое качество. Не забывайте, что работа с хлороформом может быть чрезвычайно опасной, и при выполнении этой процедуры всегда следует соблюдать меры предосторожности, такие как вытяжной шкаф

Пытаясь выполнить эту процедуру, важно помнить, что воду нужно добавлять осторожно и не допускать переполнения.