Высок объём измерение плазматической мембраны запечатывания эффективность в клетках млекопитающих

Этот анализ был разработан для решения ключевых вопросов в области биологии плазменной мембраны и для установления того, насколько эффективно поврежденные клетки могут запечатать свою плазменную мембрану. Этот метод может быть использован для измерения эффективности перепечатывания плазменной мембраны в высокой пропускной способности и выявления конкретных белков и соответствующих путей, которые являются посредниками плазменной мембраны повторного пропечатки. Начните с добавления 20 миллилитров 2,5 раза 10 до пятого HeLa клеток на миллилитр роста средней подвески в стерильный бассейн пипетки и использовать 10 миллилитров серологической пипетки тщательно перемешать клетки.

Далее, используйте многоканальный микропипют, чтобы посеять 100 микролитров клеток на колодец в тройном в 96-ну плоский, ясное дно, черный полистирол ткани культуры обработанной пластины. Помните, что однородное распределение клеток является ключом к успешному эксперименту, так как сравнение всех экспериментальных условий требует эквивалентного подсчета клеток. После 24 часов в инкубаторе увлажненной культуры клеток при 37 градусах Цельсия и 5%CO2, довоенной считыватель пластины до 37 градусов по Цельсию и установить оптическую конфигурацию монохроматора, режим чтения на флуоресценцию, и тип чтения кинетической.