Метионин функционально совместимые биосовместимые блок кополимеры для целевой плазмидной доставки ДНК

Носители полимерных полимеров имеют преимущества хорошей стабильности, низкой иммуногенности, легкой подготовки и модификации. Здесь мы предлагаем быстрый и простой метод его синтеза. Метод полимеризации реверсивной цепочки добавления-фрагментации является методом, применимым для получения блочных полимеров с контролируемым молекулярным весом и структурой и несущих функциональные группы.

Эти носители наркотиков могут одновременно нести различные препараты для достижения совместного лечения рака, воспаления и других заболеваний. Полимеризация IFT является классическим методом, и этот протокол дает пример его применения в генной терапии. Ключом к успеху синтеза этого полимера является точный контроль температуры реакции.

Более целесообразно использовать масляную баню, чем водяную баню. Чтобы начать эту процедуру, получить круглое дно колбы с резиновой пробкой и магнитной мешалки, которые будут использоваться в качестве бутылки полимеризации. Растворите 1,87 грамма бис-гидрокси HEMA в одном миллилитре дистиллированной воды в бутылке полимеризации.

В пятимиллилитровом стакане растворяют 0,03 грамма КТП и 0,02 грамма ACVA в 0,5 миллилитров 1, 4-диоксана. Добавьте эту смесь в бутылку полимеризации. Затем используйте конденсатную ловушку, чтобы заморозить раствор в бутылке полимеризации.

Зафиксируйте бутылку на опору железа, и использовать канал споткнулся с иглой пылесосить и вводить азот в реакционной смеси. Затем загерметизу бутылку полимеризации и оттаивать раствор при комнатной температуре в течение 30 минут. Повторите этот цикл замораживания-насоса-оттепели три раза.

После этого поместите бутылку в масляную ванну при 70 градусах по Цельсию и дайте раствору отреагировать в течение 24 часов под азотной атмосферой. На следующий день охладите бутылку полимеризации при нулевом градусе Цельсия и откройте резиновую пробку, чтобы прекратить реакцию полимеризации. Далее, предварительно позолоть ацетон в холодильнике при отрицательном 20 градусов по Цельсию в течение двух часов, и смешать его с раствором реакции в полимеризации бутылки в соотношении 50 к одному.

Центрифуга этой смеси на 8, 200 раз г в течение 10 минут, чтобы удалить ацетон и собирать осадок. Для очистки синтезированной поли бис-гидроксии HEMA растворите собранный осадок в двух миллилитров чистой воды. Затем смешайте его со 100 миллилитров предварительно обтертого ацетона в соотношении от одного до 50.

Центрифуга раствор на 8, 200 раз г в течение 10 минут, чтобы собрать осадок. Повторите этот процесс очистки растворения, смешивания и центрифугирования осадка три раза. Во-первых, растворить 0,96 грамма APMA и 0,93 грамма очищенной поли бис-гидрокси HEMA в пяти миллилитров дистиллированной воды в 10-миллилитровом стакане.

Растворите 0,01 грамма ACVA в 0,5 миллилитров 1, 4-диоксана, и добавить это в APMA и поли бис-гидрокси HEMA раствор. Перенесите эту смесь в бутылку полимеризации и проветрите сухим азотом в течение одного часа. Затем поместите бутылку полимеризации в масляную ванну при 70 градусах по Цельсию, и дайте ей реагировать в течение 24 часов под азотной атмосферой.

На следующий день охладите бутылку полимеризации при нулевом градусе цельсия и откройте резиновую пробку для прекращения процесса полимеризации раствора. Начнем с того, что семенные клетки MCF-7 в колодцы шести скважинной пластины с плотностью 20 000 клеток на скважину. Культура клеток в увлажненные инкубатор при 37 градусов по Цельсию с 5%углекислого газа в течение 12 часов.

После этого замените культурную среду свежей культурой среды, содержащей катиоический полимер и полиплексные полиплексы pDNA разного соотношения соотношения азота к фосфору. Культура клеток в течение шести часов, а затем заменить средний с двумя миллилитров свежих RPMI 1640 среды. Продолжайте культивирование в течение 48 часов.

Затем соберите клетки и используйте цитометр потока для обнаружения зеленой флуоресценции. В этом исследовании, мерионин-функционализированных биосовместимых блоков copolymers готовятся с помощью обратимого добавления фрагментации цепи передачи метода, и плазмидной ДНК сложности способность полученных mBG и их эффективность трансфекции исследованы. Средний размер частиц и потенциал зеты полиплексов mBG/pDNA составляет 124 нанометров и плюс 15,7 милливольт, соответственно, при соотношении N-to-P 16.

Электрофоретическая отсталость показывает, что пДНА с соотношением N-к-P нуля может двигаться без ограничений в агарозовом геле и наблюдается как полоса в гель-образе. Когда pDNA комплекс с mBG, движение pDNA задерживается, и впоследствии, яркость полосы уменьшается. Это показывает, что mBG может полностью комплекс pDNA, когда N до P выше, чем четыре.

Цитотоксия полиплексов mBG/pDNA затем измеряется с помощью стандартного анализа MTT Эти результаты показывают, что полиплексы mBG/pDNA имеют цитотоксиситность, чем полиплексы PEI/pDNA в соотношении N-to-P 4, 8, 16 и 32. Как видно также, цитотоксия полиплексов mBG/pDNA увеличивается с увеличением соотношения N-to-P. Эта повышенная цитотоксичность является результатом положительно заряженного компонента GPMA.

Соотношение N-к-P, используемое в эксперименте по трансфекции pDNA, выбирается в соответствии с результатами цитотоксичности. Способности трансфекции mBG1, mBG2 и mBG3 сравниваются путем измерения интенсивности флуоресценции GFP, и результаты показали, что mBG3 является оптимальным носителем генов. Важно исчерпать воздух из ила круглого дна колбы и поддерживать температуру реакции.

Полученные полимерные носители лекарств могут быть применены к совместной доставке химиотерапевтических препаратов и генных препаратов для синергетического лечения лекарственно-устойчивого рака. Молекулярный механизм сочетания генных препаратов и химиотерапевтических препаратов можно дополнительно изучить для лечения лекарственно-устойчивых опухолей. Ацетон оценивается как низкотоксичный для его острой токсичности.

Ключи, вдыхание или контакт с глазами или кожей следует избегать. Избегайте риска ожогов во время процедуры нагрева.