Абсорбирующие Microbiopsy выборки и извлечение RNA для малоинвазивных, одновременное крови и анализ кожи

Этот метод может облегчить создание био маркеров для кожных заболеваний, а также снизить риск для участников клинических исследований. Основными преимуществами этой техники являются то, что она не требует интенсивной подготовки и не оставляет шрамов. За пять минут до микробиопсии поместите пустую двухмилиберную центрифугу трубку на сухой лед в течение пяти минут.

Ношение одноразовых перчаток, спрей руки и инструменты с 70% этанола перед дезинфекции сайта приложения по этому вопросу с спиртом протрите. Удалите микро биопсию из стерилизованного пакета гамма-излучения, не касаясь микроиглы и потяните поршень, пока не будет слышен щелчок и поршень замки на месте. Цель загруженного устройства примерно под перпендикулярным углом к коже, чтобы быть отобраны, заботясь о том, что область выборки находится в фиксированном положении и применить устройство на кожу в течение по крайней мере одного килограмма силы.

Затем нажмите на спусковой крючок и удерживайте устройство на месте, по крайней мере десять секунд. Если устройство выпущено до десяти секунд, есть более высокая вероятность изменения в поглощении крови, а также последующий анализ. Когда образец был поглощен, осторожно вытяните поршень и абсорбированную микроиглу из корпуса и используйте стерильные типсы, чтобы тянуть на два отверстия микроиглы, чтобы удалить его из поршеня.

Добавьте 50 микролитров буфера экстракции в трубку на сухом льду и поместите нетронутую микроиглу в трубку на сухую ледяную иглу вниз. Будьте осторожны, чтобы не позволить кончик микроиглы коснуться ничего во время процесса удаления. Vortex трубки в течение трех-пяти секунд, чтобы собрать некоторые пробы материала из микроиглы отзыв и инкубировать трубку в тепловой блок или водяной бане в течение 30 минут при температуре 42 градусов по Цельсию.

В конце инкубации используйте стерильные типсы, чтобы поместить задний конец уровня микроиглы с верхним краем трубки микрофуза и закрыть крышку трубки так, чтобы верхняя часть микроиглы удерживалась между крышкой и трубкой. Центрифуга трубки для сбора отобранного материала из абсорбтного слоя устройства и использовать типсы, чтобы тщательно удалить микроиглы, не окуная кончик обратно в буферный раствор. Центрифуга образца снова и тщательно перенести супернатант в новую микро центрифугу трубки.

Затем добавьте 250 микролитров буфера кондиционирования на мембрану фильтра очищаемой колонки в течение пяти минут инкубации при комнатной температуре и разбавьте буфер центрифугой. Добавьте 50 микролитров 70% этанола в извлеченный образец РНК с нежным смешиванием и перенесите смесь в предусловную колонку очистки. Немедленно центрифуга пробка 2 времени для того чтобы извлечь поток-через, после этого после этого мыть в 100 microliters буфера мытья одного.

Для пищеварения ДНК добавьте 40 микролитров свежеприготовленной инкубационной смеси ДНК непосредственно на мембрану очищаемой колонки для 15-минутной инкубации при комнатной температуре с последующим мытьем с 40 микролитров буфера стирки. В конце центрифугации вымойте колонку 100 микролитров буфера для мытья 2 и проверьте столбец очистки на наличие остаточного буфера стирки. Перенесите очистную колонку в 0,5 миллилитровую микро центрифугу, предусмотренную в комплекте извлечения РНК, и поместите кончик пипетки прямо на мембрану очищающей колонки, чтобы добавить в колонку 11 микролитров воды РНК sPRE.

После двухминутной инкубации при комнатной температуре центрифуга столбец один раз распределит воду РНК-сПРЕ по всей колонке и один раз утегает РНК. Затем храните общий образец РНК при температуре минус 80 градусов по Цельсию, если синтез cDNA выполняется не сразу. Микроигла абсорбций состоит из двух слоев стальной пластины с абсорбентным слоем между ними для одновременного отбора проб кожи и крови.

Использование абсорбентной микробиопсии вызывает лишь незначительную эритему, что не заметно через 48 часов. После прокола, несколько крошечных кусочков кожи захвачены вблизи кончика микроиглы и кровь всасывается в фильтровальную бумагу. Когда абсорбент микроиглы удаляется сразу после прокола, объем образца и последующее количество извлеченной мРНК значительно ниже, чем получено после проведения в течение десяти секунд после прокола.

Аналогичные уровни экспрессии маркера кожи обнаруживаются после использования абсорбентной микробиопсии и ее предшественницы микробиопсии кожи путем количественного анализа ПЦР. Но значительно более высокий уровень экспрессии био маркера белых кровяных клеток обнаруживается после абсорбентной микробиопсии выборки, что свидетельствует о том, что абсорбент микробиопсии микроиглы работает лучше для сбора крови при сохранении той же способности для захвата образца кожи, как с микробиопсией кожи. Таким образом, применяя технику, важно помнить, что применение устройства в соответствии с тем, что мы предлагаем, имеет важное значение для получения надежных результатов.

Таким образом, после этой процедуры, другие методы, как в режиме реального времени ПЦР, могут следовать для относительно экспрессии генов профилирования. Хотя мы все еще разрабатываем устройство, мы уверены, что метод проложил путь для клинических исследований для выполнения выборки, для дерматологического косметического или педиатрического применения, потому что это просто так просто, и это минимально инвазивных.