4D Microscopy of Yeast

Natalie Johnson; Benjamin S. Glick

doi:10.3791/58618

JoVE Journal
Biology

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Biology

4D Microscopy of Yeast

4D Микроскопия дрожжей

Full Text

9,353 Views

12:00 min

April 28, 2019

DOI: 10.3791/58618-v

Natalie Johnson¹, Benjamin S. Glick¹

¹Department of Molecular Genetics and Cell Biology,University of Chicago

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This study employs multi-color 4D confocal microscopy to analyze fluorescently labeled intracellular compartments in budding yeast. This approach enables detailed tracking of organelle dynamics over time, improving our understanding of intracellular processes.

Key Study Components

Research Area

Cell biology
Microscopy
Intracellular dynamics

Background

Intracellular compartments play crucial roles in cellular function.
Budding yeast serves as a model organism for studying cellular processes.
Photodamage during imaging must be minimized to capture accurate data.

Methods Used

Multi-color 4D confocal microscopy
Yeast as a biological system
ImageJ plugins for quantitative analysis

Main Results

Dynamic tracking of fluorescently labeled structures over time.
Insights into the transient nature of organelles.
Enhanced understanding of intracellular dynamics through quantitative analysis.

Conclusions

The study demonstrates a robust method for observing intracellular dynamics in yeast.
Findings are relevant for advancing knowledge in cellular biology and imaging techniques.

Frequently Asked Questions

What type of microscopy is used in this study?

Multi-color 4D confocal microscopy is utilized to analyze intracellular structures.

Why is budding yeast chosen as the model organism?

Budding yeast provides a straightforward system to study cellular processes and dynamics.

How does the protocol ensure minimal photodamage?

The method includes optimized imaging parameters to limit exposure while capturing adequate signals.

What software is used for analysis?

Custom ImageJ plugins are employed for tracking and quantitatively analyzing labeled structures.

What are the implications of this research?

It enhances understanding of intracellular organelle behavior and supports future biological studies.

What type of data is generated from this microscopy method?

4D imaging data enabling dynamic analysis of fluorescently labeled structures.

Этот протокол описывает анализ флуоресцентно помеченных внутриклеточных отсеков в подающих надежды дрожжей с помощью многоцветной 4D (промежуток времени 3D) конфокальной микроскопии. Параметры изображения выбираются для захвата адекватных сигналов, ограничивая при этом фотоповреждения. Пользовательские плагины ImageJ позволяют отслеживать и количественно анализировать помеченные структуры.

Этот метод отслеживает структуры дрожжевых клеток в трех измерениях в течение многих минут, что позволяет нам изучать динамику внутриклеточных органелл и отсеков. 4D-изображение гарантирует, что мы можем сделать надежные выводы о внутриклеточной динамике, особенно для структур или маркеров, которые могут быть переходными. Демонстрация процедуры будет Натали Джонсон, postdoc из моей лаборатории.

Начните с выращивания ночной культуры дрожжей штамм интереса в пяти миллилитров нефлуоресцентных синтетических определены, или NSD, средний, в 15 миллилитров сбит с толку колбу с хорошей аэрации, при 23 градусов по Цельсию. За три-четыре часа до анализа разбавляют логаритмическую фазовую дрожжевую культуру в свежей среде NSD, так что окончательная оптическая плотность на 600 нанометров, или OD600, будет от 0,5 до 0,8 на момент визуализации. По крайней мере, за час до того, как культура будет готова, центрифуга алицита в два миллиграмма на миллилитр Конканавалина раствор в течение пяти минут на полной скорости, чтобы гранулировать любые частицы, и добавить 250 микролитров супернатанта в чистый 35-миллиметровый стеклянный нижний микроскопии блюдо.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos