Оптимизированный протокол Rhizobox для визуализации рост корня и реагировать локализованных питательные вещества

Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области корневой и ризосферной науки, такие как, как корни реагируют на локализованные участки питательных веществ. Основными преимуществами этой методики являются то, что она позволяет проводить повторные, неинвазивные измерения одной корневой системы в почве, но не требует специального оборудования и относительно недорога. Соберите детали для Rhizobox для сборки.

К ним относятся передние и задние панели из ясного акрила около 40 сантиметров на 61 сантиметр. На данный момент, Есть боковые и нижние промемители в верхней части задней панели. Космонавты выровнены с ранее просверленными отверстиями в панелях.

Вырезать длину полиэстер обивка идти вдоль нижней части Rhizobox. Положите обивку на заднюю панель прямо над нижним прокладкой, чтобы предотвратить утечку. Положите верхнюю панель в положение на прокладках, чтобы держать обивку на месте.

Теперь получить оборудование для сборки Rhizobox. Используйте винт, две шайбы, и шестиугольный орех для каждого из просверленных отверстий. Поместите шайбу на переднюю панель и затяните винт через нее на заднюю панель.

Еще одна шайба и шестиугольный орех. Чтобы избежать потери почвы, убедитесь, что все винты очень жесткие. Кроме того, создать два спейсеров для формирования лечения и управления патчи.

Сделать их с высокой плотностью полиэтиленовых листов и обеспечить винт в верхней части, чтобы только частичная вставка. Для лишения света и снижения тепла подготовьтесь к защитной чехле, который может приложить коробку. Наконец, построить кадр, чтобы поощрять корни расти против задней панели.

Эта рама из ПВХ держит коробку под углом около 55 градусов. Готовы гомогенизированную смесь полевой почвы и песка. Начните с большой мешок, содержащий смесь субстрата для каждого Rhizobox.

Этикетка два небольших ziptop мешки на коробку для лечения и управления патчи. Используйте шкалу и весят 30 граммов почвы песка субстрата. Перенесите субстрат в мешок управления.

Таким же образом добавьте 30 граммов субстрата в мешок для лечения. Затем взвесить один грамм азота 15 помечены источника азота и добавить его в мешок лечения. Тщательно смешайте источник субстрата и азота.

Работа с одним Rhizobox и это патч космосов. Вставьте два промечения в Rhizobox до тех пор, пока винт не предотвращает дальнейшее движение. Отметните глубину нижнего края проемов на стороне Rhizobox.

Затем удалите проемы для следующих шагов. Используя воронку, заполните Rhizobox из большого мешка субстрата на отмеченную глубину. Перемещение воронки вперед и назад медленно и равномерно, чтобы заполнить Rhizobox равномерно.

Когда субстрат находится на заметной глубине, поместите проемы в коробку. Они должны быть в пяти сантиметрах от левой и правой сторон коробки. Продолжайте заполнять коробку до тех пор, пока субстрат не будет примерно в пяти сантиметрах от верхней части коробки.

Далее организуйте медленное орошение субстрата в коробке со 150 миллилитров воды с капельными излучателями или вручную. Пусть он отдыхает несколько часов или на ночь, так что вода рассеивается и область вокруг каждого спейсера тщательно мокрой. На данный момент, удалить спейсеры, чтобы оставить пустую полость для патчей.

Теперь, лента прозрачности пленки за пределами коробки. Используйте прозрачность, чтобы обозначить один патч как лечение, а другой как контроль. Затем используйте воронку и подготовленный подложку управления для заполнения контрольного патча.

Это помеченный патч управления после того, как он был заполнен. Двигайтесь дальше, чтобы заполнить патч лечения с подготовленным субстратом лечения таким же образом. Когда это будет сделано, используйте постоянный маркер, чтобы проследить границу каждого патча на пленке прозрачности.

Затем заполните Rhizobox равномерно с оставшимся субстратом из большой сумки. Закончите, отслеживая верхнюю часть субстрата по прозрачности. Как только коробка будет готова, пересадить проросли семян.

Во-первых, используйте узкий шпатель, чтобы выкопать яму в центре Rhizobox. Дыра должна быть глубиной 2,5 сантиметра. Поместите проросеное семя внутрь, чтобы радикал ориентировался непосредственно вниз.

Отслеживаем расположение семени на прозрачности, прикрепленной к коробке. Обложка семян, а затем поливать его до 50 миллилитров деионизированной воды. Далее, приложите коробку в своем случае, чтобы предотвратить свет от взаимодействия с корнями во время роста.

Возьмите коробку в кадр, подготовленный для него. Поместите Rhizobox на раму, чтобы стимулировать рост к задней раме. Извлекать коробку через каждые три-четыре дня роста растений.

С случае удалены, проследить растения видимых корней с помощью различных цвет пера каждый раз. Как и в этом примере, быть последовательным и систематическим для этого шага. Верните крытый ящик на его стенд и гарантируя, что он находится в своей первоначальной ориентации.

Здесь общая длина корней прослеживаемых корней на задней части 24 Rhizoboxes построена на основе длины корня, измеренной с помощью сканера и компьютерного программного обеспечения. Аналогичный сюжет для прослеживаемых корневых узоров в передней части коробки демонстрирует корни выросли преимущественно против задней части коробки. Последовательные склоны в этом участке логаритма общей длины корня в качестве функции дней роста свидетельствуют о том, что темпы роста были похожи между различными коробками.

Вот данные по плотности корневой длины для одного генотипа кукурузы. Плотность для контрольного патча меньше, чем плотность для азота обработанных патч. Эксперимент сравнил плотность корневой длины для шести отдельных генотипов кукурузы.

Во всех случаях плотность длины корня была больше в азоте 15 помечены лечения патч по сравнению с контроль патч. Этот протокол можно комбинировать с другими методами, такими как сфигмография или флуоресценция на месте гибридизации для того, чтобы визуализировать спациальное распределение ферментной активности или микробов.