ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Эта работа была поддержана Норвежский исследовательский совет под грантов #244388, #254817 и #284983; в Норвегии онкологическое общество (#6829007); Норвежский здравоохранения региона Юго-Восточной под Грант #17/00264-6 и #2016006.

<ol><li>Porter, D. L., Levine, B. L., Kalos, M., Bagg, A., June, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chimeric+antigen+receptor-modified+T+cells+in+chronic+lymphoid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Chimeric antigen receptor-modified T cells in chronic lymphoid leukemia.</a> New England Journal of Medicine. 365 (8), 725-733 (2011).</li>
<li>Kochenderfer, J. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eradication+of+B-lineage+cells+and+regression+of+lymphoma+in+a+patient+treated+with+autologous+T+cells+genetically+engineered+to+recognize+CD19%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Eradication of B-lineage cells and regression of lymphoma in a patient treated with autologous T cells genetically engineered to recognize CD19.</a> Blood. 116 (20), 4099-4102 (2010).</li>
<li>Brentjens, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD19-targeted+T+cells+rapidly+induce+molecular+remissions+in+adults+with+chemotherapy-refractory+acute+lymphoblastic+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">CD19-targeted T cells rapidly induce molecular remissions in adults with chemotherapy-refractory acute lymphoblastic leukemia.</a> Science Translational Medicine. 5 (177), 177ra138(2013).</li>
<li>Grupp, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chimeric+antigen+receptor-modified+T+cells+for+acute+lymphoid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Chimeric antigen receptor-modified T cells for acute lymphoid leukemia.</a> New England Journal of Medicine. 368 (16), 1509-1518 (2013).</li>
<li>D'Aloia, M. M., Zizzari, I. G., Sacchetti, B., Pierelli, L., Alimandi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CAR-T+cells%3A+the+long+and+winding+road+to+solid+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+%26+Disease%22%5BJournal%5D)">CAR-T cells: the long and winding road to solid tumors.</a> Cell Death & Disease. 9 (3), 282(2018).</li>
<li>Amann, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+innovative+3D+cell+culture+system+to+study+tumour--stroma+interactions+in+non-small+cell+lung+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Development of an innovative 3D cell culture system to study tumour--stroma interactions in non-small cell lung cancer cells.</a> PLoS One. 9 (3), e92511(2014).</li>
<li>Enzerink, A., Salmenpera, P., Kankuri, E., Vaheri, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clustering+of+fibroblasts+induces+proinflammatory+chemokine+secretion+promoting+leukocyte+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Immunology%22%5BJournal%5D)">Clustering of fibroblasts induces proinflammatory chemokine secretion promoting leukocyte migration.</a> Molecular Immunology. 46 (8-9), 1787-1795 (2009).</li>
<li>Birgersdotter, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+culturing+of+the+Hodgkin+lymphoma+cell-line+L1236+induces+a+HL+tissue-like+gene+expression+pattern%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia+%26+Lymphoma%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional culturing of the Hodgkin lymphoma cell-line L1236 induces a HL tissue-like gene expression pattern.</a> Leukemia & Lymphoma. 48 (10), 2042-2053 (2007).</li>
<li>Pickl, M., Ries, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+3D+and+2D+tumor+models+reveals+enhanced+HER2+activation+in+3D+associated+with+an+increased+response+to+trastuzumab%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Comparison of 3D and 2D tumor models reveals enhanced HER2 activation in 3D associated with an increased response to trastuzumab.</a> Oncogene. 28 (3), 461-468 (2009).</li>
<li>Galateanu, B., et al. <a target="_blank" href="https://www.spandidos-publications.com/10.3892/ijo.2016.3467?text=abstract">Impact of multicellular tumor spheroids as an in vivo-like tumor model on anticancer drug response.</a> International Journal of Oncology. 48 (6), 2295-2302 (2016).</li>
<li>Shaheen, S., Ahmed, M., Lorenzi, F., Nateri, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spheroid-Formation+%28Colonosphere%29+Assay+for+in+Vitro+Assessment+and+Expansion+of+Stem+Cells+in+Colon+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reviews+and+Reports%22%5BJournal%5D)">Spheroid-Formation (Colonosphere) Assay for in Vitro Assessment and Expansion of Stem Cells in Colon Cancer.</a> Stem Cell Reviews and Reports. 12 (4), 492-499 (2016).</li>
<li>Izraely, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Metastatic+Microenvironment%3A+Melanoma-Microglia+Cross-Talk+Promotes+the+Malignant+Phenotype+of+Melanoma+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">The Metastatic Microenvironment: Melanoma-Microglia Cross-Talk Promotes the Malignant Phenotype of Melanoma Cells.</a> International Journal of Cancer. , (2018).</li>
<li>Khawar, I. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three+Dimensional+Mixed-Cell+Spheroids+Mimic+Stroma-Mediated+Chemoresistance+and+Invasive+Migration+in+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">Three Dimensional Mixed-Cell Spheroids Mimic Stroma-Mediated Chemoresistance and Invasive Migration in hepatocellular carcinoma.</a> Neoplasia. 20 (8), 800-812 (2018).</li>
<li>Merker, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+and+characterization+of+ErbB2-CAR-engineered+cytokine-induced+killer+cells+for+the+treatment+of+high-risk+soft+tissue+sarcoma+in+children%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Generation and characterization of ErbB2-CAR-engineered cytokine-induced killer cells for the treatment of high-risk soft tissue sarcoma in children.</a> Oncotarget. 8 (39), 66137-66153 (2017).</li>
<li>Mittler, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-Content+Monitoring+of+Drug+Effects+in+a+3D+Spheroid+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Oncolology%22%5BJournal%5D)">High-Content Monitoring of Drug Effects in a 3D Spheroid Model.</a> Frontiers in Oncolology. 7, 293(2017).</li>
<li>X Tadesse, F. G., Mensali, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unpredicted+phenotypes+of+two+mutants+of+the+TcR+DMF5%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">Unpredicted phenotypes of two mutants of the TcR DMF5.</a> Journal of Immunological Methods. 425, 37-44 (2015).</li>
</ol>

Авторы не имеют ничего сообщать.

Использование сфероидов как новаторский инструмент для проверки будущих рака лечение стало поле растущий интерес в последние годы. Сфероидов представляют собой промежуточный шаг между классического 2D в пробирке анализа и оценки в естественных условиях. Метод также проводит много обещаний относительно их эффективность с точки зрения опухоли микро среды, подражая а также гена, профилирование7. Протокол, представленное в настоящей публикации был адаптирован от Saheen et al.<sup class="xref"...

Приемных клеток передачи (ACT) представляет следующее поколение лечения рака. Он полагается на инъекции эффекторных клеток (Т - и NK-клеток) в пациента. Эти клетки могут быть генетически модифицированных с рецепторами, которые будут направлять их в свои цели, опухоль и уничтожить его. Недавно этот подход был показан быть осуществимым, когда рецептор химерных антигена (автомобиль), направленных против B-клетки маркер CD19 был введен в клетки пациента T убить его рака1. В случае автомобиль, который является искусственным рецепторов, конструкция состоит из фрагментов специфическое антитело, антиген привязки домене сокращен до сущности назначенный одной цепи переменных фрагмента (scFv), связан с Т-клеточной сигнализации доменов. Хотя есть несколько конструкций, наиболее часто используемые версии упоминаемый как второго поколения автомобилей конструкций, состоят из CD3z для сигнализации TCR и один co-stimulatory домен (CD28, 4-1BB, OX40, и т.д.) 1 , 2. поле иммунотерапии направлено большую часть своего внимания к этой новой форме акта когда CD19 автомобилей-Т-клетки эффективно многочисленных пациентов с B клетки злокачественных опухолей3,4. После этого успеха исследователи пытались использовать подобные конструкции, ориентация другие epitopes для солидных опухолей с ограниченным успехом. К сожалению нехватка специфических антигенов тумора и жестче опухоли микросреды, оказываемых автомобилей T клетки менее эффективными, к5солидных опухолей.
В настоящее время наиболее часто используемых в vitro проверки стратегии полагаются на двухмерный (2D) систем, которые касаются только фрагмент проблем уже упоминалось твердые опухоли. Классически 2D в vitro систем представляет собой смесь автомобилей Т-клеток и целевой рак клеточных линий как монослои оценить функциональность и специфика этих клеток-эффекторов. Хотя эти стратегии являются важной и неотъемлемой частью исследований, они не учитывать сложную морфологию и трехмерные (3D) Структура клетки рака6. Раковые клетки культивировали в 3D систем, именуемый сфероидов, приобрести новые фенотипических признаков путем внесения изменений в ген выражение профиля7, которые могут повлиять на признание перенаправленный эффекторных клеток. Birgersdotter и коллеги продемонстрировал, что линия клетки лимфомы (HL) Ходжкина когда только выращенные в модели 3D культуры приобретает профиль выражение гена, который похож на первичной опухоли образцы8. Таким образом сфероидов или аналогичных 3D культуры методологии предложение более актуальными в моделях in vitro в отличие от стандартных 2D систем. Такие системы аналогичны также в vivo исследований, которые рассматриваются как последний шаг в процессе проверки данного автомобиля. Учитывая, что 2D системы не могут имитировать морфология рака кластеров, сфероидов предлагают аналогичные образований оценить функциональность автомобиля Т-клетки до в естественных условиях модели. В одном исследовании, Pickl et al. определили, что модель сфероида рецептора человека эпидермального фактора роста (HER2), экспрессирующих раковые клетки продемонстрировали аналогичные сигнализации профили в естественных условиях модели9. Это далее поддерживает сфероидов предлагают более актуальной и закрыть чтобы в vivo оценки автомобиля Т-клеток. Кроме того, проверка автомобилей Т-клеток против сфероидов может помочь более критически оценить их эффективность и предотвратить некоторые из образцов от переезда в vivo исследований преждевременно10; Таким образом вклад этически соответствующих исследований, жертвуя меньше животных. Кроме того протоколы, используя сфероидов не дороже, чем классический 2D систем и гораздо быстрее по сравнению с классической в vivo исследований. Взятые вместе, можно предсказать, что включение исследований сфероида вскоре станет стандартной практикой для увязки исследований в vitro и in vivo.
Здесь мы представляем подготовки сфероидов от линии клетки рака толстой кишки HCT 116. Эта линия клетки была изменена, чтобы выразить человека CD19 молекулы оказать чувствительны к CD19 автомобилей Т-клеток и обеспечить четкую оценку убийства, используя клинически проверенных автомобиль конструкт.

<table><tbody><tr><td>Дульбекко s Фосфатный буферный физиологический раствор</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>D8537-500ML<</td>strong<td>>Номер партии: RNBG7037</td></tr><tr><td>75 см&sup2; колбы зоны роста</td><td>VWR</td><td>430639</td><td>Номер партии: 2218002</td></tr><tr><td>75 см&sup2; колбы зоны роста</td><td>VWR</td><td>734-2705</td><td>Номер партии: 3718006</td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA</td><td>SIGM-ALDRICH</td><td>T3924-100ml</td><td>Номер партии: SLBTO777</td></tr><tr><td>RPMI 1640 med L-glutamin, 10 x 500 мл</td><td>Life Technology (Gibco)</td><td>21875-091</td><td>Номер партии: 1926384</td></tr><tr><td>Фетальная бычья сыворотка</td><td>Gibco</td><td>10500064</td><td>Номер партии: 08Q3066K</td></tr><tr><td>Gentamicin</td><td>Thermo Fischer</td><td>15750060</td><td> Номер партии: 1904924A</td></tr><tr><td>Трипановый синий раствор, 0,4%</td><td>Thermo Fischer</td><td>15250061</td><td>Номер партии: 1886513</td></tr><tr><td>96-луночная пластина, круглое дно</td><td>VWR</td><td>734-1797</td><td>Номер партии: 33117036</td></tr><tr><td>Dynabeads Human T-Activator CD3/CD28</td><td>Thermo Fischer</td><td>11132D-X-VIVO</td><td></td></tr> <tr><td>15 с гентамицином L-Gln, фенол красный, 1 л</td><td>BioNordika</td><td>BE02-060Q</td><td>Номер партии: 8MB036</td></tr><tr><td>CTS Замена сыворотки иммунных клеток</td><td>Thermo Fischer</td><td>A2596102</td><td>Номер партии: 1939319</td></tr><tr><td>IL-2 Proleukin</td><td>Novartis</td><td></td><td>Номер партии: 505938M</td></tr><tr><td>IncuCyte Annexin V красный реагент</td><td>Essen Bioscience</td><td>4641</td><td>Номер партии: 17A1025-122117</td></tr><tr><td>Резервуар для реагентов</td><td>VWR</td><td>89094-672</td><td>Номер партии: 89094-672</td></tr><tr><td>15 мл пробирки</td><td>VWR</td><td>734-1867</td><td>Номер партии: 19317044</td></tr><tr><td>античеловеческий CD19-PE</td><td>BD Biosciences</td><td>555413</td><td>Номер партии: 4016990 RRID: AB_395813</td></tr><tr><td>Biotin-SP (длинный спейсер) AffiniPure F(ab')2 Fragment Goat Anti-Mouse IgG</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>115-066-072</td><td>Номер партии: 129474: RRID: AB_2338583</td></tr><tr><td>Streptavidin-PE</td><td>BD Biosciences</td><td>554061</td><td>Номер партии: 5191579: RRID: </сильный> AB_10053328</td></tr><tr><td>HCT 116 Линия колоректальной карциномы</td><td>ATCC</td><td>CCL-247-Incucyte</td><td></td></tr> <tr><td>S3</td><td>Essen Bioscience</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

Убийство assay сфероида клетками t автомобилей

A Spheroid Killing Assay by CAR T Cells

Иммунотерапия стала полем растущий интерес к борьбе против рака в противном случае неизлечимого. Среди всех методов иммунотерапевтических химерных антигена рецепторов (автомобиль) перенаправлены Т-клеток, полученные наиболее впечатляющих результатов, в частности с детской B-острый лимфобластный лейкоз (B-ALL). Методы классической проверки автомобилей Т-клеток полагаются на использование специфики и анализов функциональность автомобиля Т-клеток против клеток-мишеней в суспензии и в моделях ксенотрансплантата. К сожалению, замечания, сделанные в пробирке часто отделены от результатов, полученных в естественных условиях, и много усилий и животных можно избежать, добавив еще один шаг: использование 3D культуры. Производство сфероидов из потенциальных клеток-мишеней, которые имитируют 3D структура опухолевых клеток, когда они являются прижившимися в животной модели является идеальной альтернативой. Здесь мы приводим доступный, надежный и простой способ получения сфероидов от линии transduced толстого кишечника клетки как инструмент проверки для приемных клеточной терапии (здесь подтверждается CD19 автомобилей Т-клетки). Этот метод в сочетании с передовой живой тепловизионной системы, которая может следовать сфероида роста, эффекторные клетки цитотоксичности и опухоли апоптоза клеток.

Как видно на рисунке 1, важно проверить подачей cytometry уровень выражения CD19 автомобиля на Т-клеток (рис. 1A) и уровень CD19 на HCT116 опухолевых клеток линии (рис. 1B). Рисунок 2 иллюстрирует результат эксперимента типичный сфероида. Автоматизированный аппарат изображений принимает фотографии в четырех различных каналов: яркие области, фаза, зеленый и красный флуоре...

Этот протокол предназначен для оценки иммунотерапевтических перенаправленный цитотоксичность T-клеток (автомобилей Т-клеток) против 3D структурированные раковые клетки (сфероидов) в режиме реального времени.

Убийство Assay сфероида клетками T автомобилей

Immunotherapy has become a field of growing interest in the fight against cancer otherwise untreatable. Among all immunotherapeutic methods, chimeric ...

Этот метод может помочь ответить на ключевой вопрос в области иммунотерапии об оценке цитотоксичности иммунных клеток против опухолевых клеток 3D-структуры. Основные преимущества этого метода в том, что он прост и сочетает в себе передовые технологии визуализации и чувствительный иммунологический анализ. Начните с мытья колоректальной линии раковых клеток, представляющих интерес с пятью миллилитров PBS и удаления клеток из колбы дно с 0,5 миллилитров трипсина в течение пяти минут при 37 градусов по Цельсию.Подтвердив отслоение под микроскопом, нейтрализуем фермент диссоциации клеток с помощью 10 миллилитров полной среды и собирайте клетки путем центрифугации. Переусердуйте гранулы в пяти миллилитров свежей полной среды для подсчета и повторного перерасхода клеток в 1,5 раза от 10 до третьих клеток на миллилитр концентрации. Затем семя 200 микролитров клеток в каждой колодец 96-хорошо круглой нижней пластины и поместите пластину в автоматизированный аппарат визуализации внутри 37 градусов по Цельсию инкубатор с 5%CO2 и 95% влажности.Войдите в программное обеспечение для приобретения аппарата и выберите Расписание для приобретения, запуска добавить судно, сканировать по расписанию, и создать судно новое. Далее выберите тип сканирования Spheroid и выберите соответствующие ярко-полевые и флуоресцентные каналы, представляющие интерес. Установите увеличение в 10 раз и выберите модель пластины и ее положение в ящике аппарата визуализации.Выберите положение колодцев для изображения и введите описание эксперимента, включая название, тип ячеек и количество ячеек. Для настройки анализа выберите анализ отсрочки до более поздних дней, нажмите правой кнопкой мыши на временной шкале, а также выберите интервал выбранной группы сканирования и установите Add Scans каждые четыре часа и в общей сложности до 24 часов. Затем установите время начала, по крайней мере, через час после инкубации в автоматизированном аппарате визуализации.Чтобы проверить прогресс роста сфероидов, каждые два дня войдите в программное обеспечение для визуализации и выберите Просмотр последних сканирований. Дважды нажмите на эксперимент, представляющий интерес, и выберите Brightfield в панели каналов изображения. Затем используйте инструмент Функции измерения изображения для измерения диаметра сфероидов, добавляя 50 микролитров полной среды на колодец на четвертый день, чтобы ограничить любые эффекты среднего испарения.Когда сфероиды достигают соответствующего экспериментального размера, тщательно угол пластины и использовать многоканальную пипетку, чтобы аккуратно удалить 150 микролитров полной среды из каждого хорошо, не нарушая сфероидов. Затем замените отбрасываемую среду на 50 микролитров раствора Annexin V Red и поместите пластину в инкубатор клеточной культуры на 15 минут. Центрифуга трансдуцированных CAR CD19 Т-клеток в 15 миллилитров конической трубки и повторно гранулы в двух миллилитров полной среды.После подсчета, разбавить клетки в два раза от 10 до пятой клетки на миллилитр полной средней концентрации. Затем добавьте 100 микролитров клеток CAR CD19 T к каждому сфероидно-содержащему колодец и верните пластину в автоматизированный аппарат визуализации. В программном обеспечении для приобретения выберите Расписание для приобретения и нажмите правой кнопкой мыши на Хронике сканирования.Выберите Хронологию редактирования и нажмите правой кнопкой мыши на группу сканирования, чтобы удалить ее. Нажмите на Хронику снова и выберите Набор Выбранный интервал группы сканирования и установите Добавить сканирование каждые 1 1 / 2 часа и в общей сложности до 24 часов. Затем установите время начала изображения по крайней мере через час после начала инкубации в автоматизированном аппарате визуализации и выберите Сохранение Расписание сканирования.Для автоматизированного анализа изображений в программном обеспечении сканирования выберите просмотр последних сканирований и анализ запуска. Выберите Создание нового определения анализа и анализа типа сфероидов и установите каналы изображения для анализа. Выберите не менее 10 репрезентативных изображений и просмотрите процедуру анализа по умолчанию на всем стеке изображений.Измените параметры ярко-полевой маски и просмотрите стек изображения, подтвердив, что выбранные параметры точно обнаруживают сфероиды. Измените параметры зеленой маски и просмотрите стек изображения, чтобы подтвердить, что выбранные параметры точно обнаруживают сфероиды. Измените параметры красной маски и просмотрите стек изображения, чтобы подтвердить, что выбранные параметры точно обнаруживают сфероиды.Позаботьтесь о том, чтобы достичь наилучшего сигнала по шуму и чувствительности по отношению к специфичности, имея в виду, что вы не сможете найти набор параметров, которые позволят запечатлеть каждое событие в любой момент времени. Затем запустите анализатор. Когда анализ будет завершен, извлекайте измерение интереса и выберите проанализированный файл и параметр метрик графа.Выберите показатели, представляющие интерес, сканирование и колодец. Нажмите Export Data для извлечения выбранных метрик в нескольких форматах файлов. Затем, чтобы извлечь изображения, выберите анализируемый файл и выберите Export Images and Movies.Выражение CD19 CAR на трансинированных Т-клеток и выражение CD19 на трансинированных колоректальных раковых клетках может быть подтверждено цитометрией потока. Здесь можно наблюдать результаты типичного сфероидного эксперимента. В отличие от макетА Т-клеток, CD19 CAR Т-клетки способны специально убить колоректальных раковых клеток линии полученных сфероидов, значительно уменьшая количество живых опухолевых клеток.Отслеживание эволюции общего зеленого и красного сигналов в пределах сфероидных границ с течением времени показывает, что вскоре после CD19 CAR T-клеток инъекции, размер сфероидов быстро уменьшается, как апоптоз сигнал быстро увеличивается. После этой процедуры, другие методы, такие как анализ токсичности, анализ миграции клеток, или измерения структуры сфероидов могут быть выполнены, чтобы ответить на дополнительные вопросы о скрининге наркотиков, подвижности Т-клеток, или образование сфероидов, соответственно.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Исследования рака

Сфероиды - это тип 3D-модели клеточной культуры, используемый для более точного представления клеточной среды по сравнению с 2D-моделями монослоев клеточных культур. В примере протокола мы увидим, как ученые генерируют сфероиды из клеточной линии колоректального рака и применяют визуализацию живых клеток для отслеживания роста сфероидов.

Генерация сфероидов из клеточных линий: трехмерный (3D) метод культивирования клеток

В этом видео мы демонстрируем анализ повторяющихся опухолей для оценки потенциала повторяющихся опухолей CAR-T-клеток при высокой нагрузке опухолевых клеток. Кроме того, CAR-Т-клетки могут быть проанализированы с помощью проточной цитометрии для определения различных субпопуляций CAR-Т-клеток в образце.

Провокационный анализ повторяющихся опухолей: культуральный анализ in vitro для оценки Т-клеток химерного антигенного рецептора (CAR) на потенциал уничтожения повторяющихся опухолей

Это видео демонстрирует метод мониторинга активности CAR-Т-клеток против раковых клеток с помощью измерений электрического импеданса в реальном времени. Отслеживание изменений импеданса позволяет оценить эффективность CAR-Т-клеток в индуцировании цитолиза раковых клеток, что дает представление об их цитотоксических возможностях.

Анализ цитолиза in vitro в режиме реального времени для оценки активности CAR-Т-клеток

Это видео демонстрирует анализ in vitro, оценивающий цитотоксические эффекты CAR-Т-клеток на трехмерные опухолевые сфероиды, экспрессирующие флуоресцентные белки. Для этой оценки используется красный флуоресцентный зонд Annexin V, который связывается с остатками фосфатидилсерина на наружной створке раковых клеток апоптоза после взаимодействия с CAR-Т-клетками. Красная флуоресценция, излучаемая зондом, помогает отличить эти клетки от здоровых, излучающих зеленую флуоресценцию.

Анализ in vitro для оценки цитотоксичности CAR-Т-клеток в отношении опухолевых сфероидов

Это видео демонстрирует анализ in vitro для проверки активности химерных антигенных рецепторов (CAR) Т-клеток. Клетки В-клеточной лимфомы, экспрессирующие антиген CD19 и цитоплазматическую люциферазу, культивируют совместно с CD19-специфичными CAR-Т-клетками. Связывание CAR с CD19 в опухоли заставляет CAR-T-клетки высвобождать цитокины и токсины, которые вызывают цитотоксичность опухолевых клеток. Активность CAR-Т-клеток оценивают путем количественного определения высвобождаемого цитокина и...

Анализ in vitro для оценки противоопухолевой активности опухолеспецифичных CAR-Т-клеток

Мы описываем одноклеточных высокой пропускной способностью анализа для оценки цитотоксичности Т-клеток при инкубации с опухолевыми клетками-мишенями. Этот метод используется плотная, эластомерных массив к югу от nanoliter скважин (~ 100000 скважин / массив) для пространственно ограничить Т-клетки и клетки-мишени в определенных соотношениях и соединен с флуоресцентной микроскопии для контроля эффекторных-целевого сопряжения и последующего апоптоза.

Количественные высокой пропускной Single-клеточной цитотоксичности анализа для Т-клеток

Мы описываем эволюции на основе сфероида, трехмерный в vitro модель, которая позволяет нам проверить текущий стандарт экспериментальной терапии схем для головы и шеи плоскоклеточный рак на клеточных линий, направленных на оценку терапии восприимчивость и сопротивления на первичной клетки от человеческих образцов в будущем.

Терапия, тестирование в модели культуры на основе сфероида 3D клеток для головы и шеи плоскоклеточный рак

Мы описываем количественную систему анализа цитолизва в реальном времени в режиме реального времени для оценки потенции химерных антигенных рецепторов Т-клеток, нацеленных на жидкие и твердые опухолевые клетки. Этот протокол может быть расширен для оценки других клеток иммунного эффектора, а также комбинированных методов лечения.

В режиме реального времени потенции Асса для химерных антигенов рецепторов T клеток ориентации твердых и гематологических раковых клеток

В этой статье мы представляем метод идентификации соединений, которые модулируют механизм ADCC, важный механизм уничтожения раковых клеток противоопухолевыми антителами. Цитотоксический эффект NK-клеток измеряется в сфероидах клеток рака молочной железы в присутствии трастузумаба. Анализ изображений позволяет идентифицировать живые и мертвые клетки-убийцы и клетки-мишени в сфероидах.

Количественная оценка антителозависимой клеточной цитотоксичности в модели сфероида опухоли: заявка на разработку лекарственного препарата

Здесь мы опишем метод создания двойных эмульсионных капель, инкапсулирующих одну Т-клетку и раковую клетку-мишень, для изучения уничтожения клеток на уровне одной клетки. Этот метод позволяет проводить двойное количественное определение как цитотоксических молекул, так и апоптоза клеток-мишеней в большой популяции Т-клеток.

Анализ цитотоксичности на основе капель для оценки химерных антигенных рецепторов Т-клеток на уровне одиночных клеток

Узнайте метод оценки цитотоксичности CAR T-клеток против трёхмерных сфероидов опухоли в реальном времени с помощью автоматизированной визуализации. Этот подход помогает исследователям разрабатывать эффективные иммунотерапии рака.

Убийство Assay сфероида клетками T автомобилей

Больше видео