Обнаружения эндотоксинов в нано составов с помощью анализов Lysate (Лал) Amoebocyte Limulus

Этот метод может помочь ответить в медицинской области о безопасности нано лекарств. Преимущества этого метода является то, что он является стандартным, и используется во всем мире для оценки продуктов, нано лекарства. Демонстрация процедуры, будет Барри Нойн, на Nano технологии Характеристика лаборатории.

Для стандартной калибровки используется 900 микролитров лимулус-амибоцитов лизатата, или воды класса LAL. И 100 микролитров контрольного стандартного эндотоксина, чтобы подготовить как можно больше промежуточных разбавлений по мере необходимости, чтобы обеспечить подготовку стандарта калибровки с концентрацией одного эндотоксина единицы на миллилитр. Затем с помощью 900 микролитров воды класса LAL и 100 микролитров одного эндотоксина на миллилитр калибровки стандарта, подготовить второй стандарт калибровки, в концентрации 0,1 эндотоксина единицы на миллилитр.

Затем повторите серийное десятикратное разбавление, чтобы подготовить два более низких стандарта калибровки. Чтобы получить в общей сложности четыре стандарта калибровки, начиная от 0001 до одного эндотоксина единицы на миллилитр. Для подготовки 05 эндотоксин единицы на миллилитр контроля качества, сочетает в себе 50 микролитр одного эндотоксина единицы на миллилитр контрольного стандартного эндотоксина раствора, с 950 микролитров воды класса LAL.

Далее в программном обеспечении выберите настройки инструмента и создайте шаблон. Выберите сбор данных и введите тестовый идентификатор и группу данных в общей вкладке. Под аппаратной вкладкой выберите тип инструмента и метод LAL и убедитесь, что на экране появляется серийный номер, идентификатор системы и информация о серийном порту.

Нажмите хорошо два раза, чтобы подтвердить выбор инструмента, и связь с инструментом, и ввести образец ID в том же порядке, что образцы будут протестированы. Затем используйте кнопки по умолчанию, чтобы ввести стандартную кривую отрицательного управления и протестировать образцы. Добавьте соответствующий объем отрицательных стандартов калибровки контроля и контроля качества в дублирующие предварительно помеченные стеклянные трубки.

И добавить соответствующий объем LAL к первому тесту мерзкий. Vortex мерзкий кратко, и поместите флакон в соответствующие слоты испытаний в приборной карусели. Перед загрузкой образцов выполните несколько разбавления испытательного наноматериала в пределах максимально допустимого разбавления, как это было продемонстрировано.

Для подготовки 05 эндотоксин единицы на миллилитр контроля повышения ингибирования, объединить 25 микролитров одного эндотоксина единицы на миллилитр контрольного стандартного эндотоксина раствора, с 475 микролитров тест нано материала при данном разбавлении. После вихрей загрузите соответствующие элементы управления усовершенствования инноваций и неспикуювые образцы исследования в прибор. Затем aliquot unspiked и шипами нано материалов при определенном разбавлении в предварительно помеченных труб.

Перед вихрем, и загрузка в инструмент карусели. Для выполнения Гель-Клот LAL, подготовить контроль стандартный эндотоксин для окончательной концентрации четырех lambda, и объединить 100 микролитров стандарта, с 100 микролитров воды, или тестовый образец для достижения окончательной концентрации контроля стандартного эндотоксина два lambda. Добавьте 100 микролитров лизина к каждому разбавлению лямбды.

Vortex трубки кратко, и место стойки труб в 37 градусов по Цельсию водяной бане в течение одного часа. В конце инкубации, инвертировать трубы с плавным движением, и вручную записывать результаты, используя плюс для твердого сгустка, и минус для не сгусток, или свободный сгусток. В этом репрезентативном анализе, PEGylated липосомальный доксорубицин мешали хромогенного LAL при разбавлении пять, однако это вмешательство было преодолено при более высоких разбавлениях.

Восстановление Спайка было между 50 и 200%, когда формула была протестирована при разбавлении 50 и 500 в мутности и хромогенном LAL, а также при разбавлении пяти, в мутности LAL. При корректировке фактором разбавления, результаты были последовательны между заблуждениями в обоих эссе. Кроме того, результаты согласуются между тремя форматами эссе.

Помните, что каждый образец имеет свой собственный диапазон разбавлений, каждый формат LAL использует свой стандарт управления в доксином и лисаде, и что трубки, используемые для подготовки разбавления, и для выполнения реакции на различных для каждого эссе LAL. Для этой процедуры другие методы, такие как может быть выполнена, чтобы ответить на дополнительные вопросы о материале После его развития, этот метод проложил путь для швов и области нано медицины, для изучения медицинских применений нано-технологий, сформулированных препаратов в организме человека, и клинических моделей, включая, но не ограничиваясь не человеческих приматов, кроликов, собак и крыс. Не забывайте, что работа с доксином может быть чрезвычайно опасной и такие меры предосторожности, как ношение средства индивидуальной защиты, всегда должны быть приняты при выполнении этой процедуры.