12 мая 2019 г.
В этой статье вводится экспериментальный протокол с использованием технологии 3D-сканирования, преодолевая две пространственные шкалы: макроскопическую пространственную шкалу анатомии всего мозга, изображенную МРТ на уровне 100 мкм, и микроскопическую пространственную шкалу нейронных распределений с использованием иммуногистохимии окрашивания и мультиэлектродной системы массива и других методов (10 мкм).
Этот протокол является первым внедрением технологии 3D-сканирования в анатомической, в частности нейроанатомической области исследований, и добился высокой точности перекрывающихся производительности. 3D нейро встраивание перекрытия, или 3D нейро протокол, встраивает микро-масштаб стерильных розеток в макро-масштаб изображения мозга, и мосты этих различных пространственных масштабах бесшовно. Мы также должны применить 3D нейро протокол для человека МР ИИ и посмертного мозга.
Перекрытие позволяет нам определить известные модели контраста МРТ, связанные с болезнью. Системы 3D-сканирования чувствительны к воде, окружающей извлеченный био организм, поэтому очень важно очень тщательно протирать воду. Кроме того, процедура должна быть выполнена как можно быстрее.
Начните эту процедуру с подготовки мыши, а также ПРИОБРЕТЕНИЯ МРТ и подготовки оборудования, как описано в текстовом протоколе. На второй день, вырезать кожу головы ранее усыпанной мыши вдоль sagittal шва с помощью хирургических ножниц. Используйте хирургические ножницы, чтобы сократить череп по диагонали от точки ламбды до точки немного перед брегмой.
Затем аккуратно снимите череп с мозга с помощью изогнутых пинцетов. Поднимите мозг шпателем и перенесите его в чашку Петри с ледяным раствором резки. Используя внешнюю газовую бомбу с контролируемой скоростью вращающегося насоса, поток воздуха, содержащий 95% кислорода и 5%углекислого газа для генерации небольших пузырьков в ледяном растворе резки.
Через одну-две минуты положите мозг на ткань из микроволокна, поверхность которой слегка покрыта мучиной сито. Аккуратно протрите жидкость с поверхности мозга с помощью ткани микроволокна. Положите мозг, с его спинной аспект вверх, на стенде образца.
Затем поместите стенд образца в центр автоматического вертушки. Затемните комнату во время 3D-сканирования и выполните 3D-сканирование на вертушках. Чтобы проверить, хорошо ли работает 3D-сканирование, нажмите 3D Scan, выбрав угол между двумя выстрелами, как 22,5, стартовый угол как ноль, и окончательный угол, как 360.
Перемести мозг на чашку Петри и пузырь мозга в решении резки в течение примерно 10 секунд. Разрежьте мозг на два блока посередине корональной плоскости, используя скальпель. Затем аккуратно переместите два блока мозга на плоскую поверхность с помощью хирургического шпателя.
Прикрепите мозговые блоки базы блока мозга с помощью мгновенного клея. Мягко и тщательно протрите жидкость с поверхности мозга в течение одной-двух минут, используя ткань микроволокна. Затем снова выполните 3D-сканирование.
Прикрепите лезвие к держателю лезвия вибромы. Прикрепите черную ленту, покрывающую центр основания блока мозга, к центру режущей сцены для вибромы. Налейте резки раствор в стадии резки и установить этап резки на виброме.
Отрегулируйте скорость резки и амплитуду. Сделайте два-пять коронных ломтиков толщиной 300 микрон из двух блоков мозга. Держите раствор в стадии резки восходящей, если это возможно.
Оптимизируйте скорость резки, частоту и амплитуду вибрации системы, установив их как 12,7 миллиметра в минуту для скорости, от 87 до 88 герц для частоты и от 0,8 до 1,0 миллиметра для ширины качели. При резке ломтиков мозга, запись нарезанный координаты в формате, в том числе передней задней координаты, полушария и других условий. Аккуратно перенесите ломтики мозга в стакан, наполненный предварительно разогретой ACSF с помощью толстой пластиковой пипетки.
Инкубировать ломтики мозга в стакане при примерно 34 градусах по Цельсию в течение одного часа. За это время выполните 3D-сканирование оставшихся блоков мозга на стадии резки. Теперь установите многоэлектрородный массив, или чип MEA, на блок записи.
Подключите чип к перистальтическому насосу с помощью двух трубок. Используйте одну трубку, чтобы направлять тот же ACSF в чип MEA, а другую трубку, чтобы направлять ACSF из чипа MEA. Прикрепите две иглы, соединенные на кончиках двух трубок, к верхней части стенки чипа MEA.
Исправьте их положения с их подсказками следуя за внутренне стеной обломока MEA. Установите скорость потока ACSF до 4,1 об/мин. Выполните обработку данных МРТ для извлечения корковых объемов, описанных в текстовом протоколе.
Для выполнения обработки изображений МРТ загрузите свободное программное обеспечение 3D Slicer. Откройте MR-изображения извлеченных мозгов, которые были получены с помощью модуля рендеринга громкости и редактора в 3D Slicer. Измените режим от редактора к рендерингу громкости и нажмите на целевую кнопку, чтобы изображение мозга пришло в центр экрана.
Выберите режим мозга MRT-2 и настройте пороги, перемещая планку смены. Затем переместите от рендеринга громкости к редактору и нажмите кнопку эффекта порога. Нанесите этикетку 41, кору головного мозга.
Затем сохраните данные поверхности мозга в виде файла STL, изменив формат файла с VTK на STL в контрольном списке формы. Выполните автоматическую корегистрацию между восемью или 16 изображениями, сделанными из восьми или 16 различных углов в последовательности сканирования для исправления небольших несоответствий. Для этого щелкните Глобальную регистрацию, включенную в опцию выравнивания, и интегрируйте изображения.
Повторите сканирование под разными углами, чтобы получить всю поверхность мозга. Если интеграция между изображениями, отсканированными под разными углами, не была успешной, нажмите Ручное выравнивание и выберите пару фиксированного изображения и движущийся образ. Начните ручное выравнивание изображений, выбрав три или четыре общие точки в разных изображениях.
Затем щелкните OK. Алгоритм оптимизации является итеративным алгоритмом ближайшей точки и не включает нелинейную деформацию. Сделайте сетку из всех выровненных изображений, выбрав все изображения и нажав кнопку генерации сетки. Затем выберите опцию, небольшой художественный объект, чтобы получить сетку в самом высоком разрешении.
Сохраните изображение как STL Binary или формат ASCII. Теперь откройте поверхность МРТ и объедините ее с поверхностью 3D-сканирования с помощью программного обеспечения для обработки поверхности. Выполните ручной процесс выравнивания, как и раньше.
Затем снова сохраните эти основные изображения поверхности. При необходимости очистите отдельные поверхностные данные, стирая небольшие шумы, окружающие область мозга, особенно в случае данных МРТ, и заполняя любые отверстия, особенно в случае данных 3D-сканирования. Наконец, откройте поверхностные данные с помощью программного обеспечения для анализа данных, такого как MATLAB.
Создание и оценка гистограмм минимальных расстояний между двумя поверхностями. Расстояния оценивались между корковыми поверхностями, полученными путем зачистки объема МРТ, и поверхностями, полученными в результате 3D-сканирования извлеченных мозгов. Значения режима гистограммы расстояний всего 55 микрон.
Кроме того, при накоплении гистограммы из точки, где расстояние равно нулю, накопленное значение достигает 90% от общего количества выборки примерно в 300 микрон. Окончательная гистограмма расстояний между двумя поверхностями показала типичный пик около 50 микрон. С макроскопической точки зрения это значение режима соответствует геометрическому ограничению, которое составило 100 микрон от размера вокселя МРИ.
Этот момент косвенно предполагает, что алгоритм перекрытия между МРТ и 3D-сканированием работал превосходно хорошо, и что уровень шума как МРТ, так и 3D-сканирования был подавлен как низкое значение. Этот протокол является первым, чтобы uprise через технологию сканирования для био-организма. Технология изначально использовалась для чисто инженерных требований.
Применение этой технологии в медицине может ответить на новые вопросы. После 3D-сканирования, мы можем использовать кальций-изображения стены патч грамм записи, чтобы получить дополнительные знания с точки зрения временного и пространственной разрешения и рекордное количество клеток. Высокая точность перекрывающихся характеристик, обеспечивает этот протокол, сделает более реалистичной бесшовную связь между анатомической пространственной шкалой и нулевой пространственной шкалой.
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео
В данной статье представлен новый экспериментальный протокол, использующий технологию 3D сканирования, который интегрирует как макромасштабную анатомию мозга, смоделированную МРТ (>100 мкм), так и микромсштабные нейронные дистрибуции с помощью иммуногистохимии и многоэлектродных массивов (~10 мкм). Этот подход позволяет точно картографировать нейронные структуры и их соответствующие функции.
This protocol bridges macroscopic and microscopic brain imaging scales, enabling precise spatial correlation of neural structures. By integrating 3D scanning with MRI and electrophysiology, it supports target validation through improved anatomical fidelity in disease-relevant systems. The method enhances predictive confidence in preclinical models by reducing mechanistic ambiguity in multiscale brain mapping.
The method positions itself within the discovery continuum from early target validation to preclinical mechanistic studies, supported by its ability to integrate structural and functional data across scales.