10,595 Views
•
07:29 min
•
March 08, 2019
DOI:
Этот протокол имеет важное значение, поскольку он производит наилучшие возможные модели для легочной артериальной гипертензии. Никакая другая модель не производит плексиформных поражений, найденных у пациентов с ПАУ человека. Основным преимуществом является то, что мы удваиваем поток крови в правом легком и легочной артерии, вызывая эндотелиальный ущерб и заставляя легкие работать в два раза больше.
Наша группа разработала высокоэффективную модель легочной артериальной гипертензии для разработки терапевтических средств. Помимо легочной артерии гипертонии, этот метод может быть полезным в регенеративной медицине и может дать представление о других заболеваний с увеличением легочного потока, как врожденные пороки сердца или после пневмонэктомии пациентов. Для тех, кто никогда не выполнял эту технику, мой совет заключается в том, чтобы следовать протоколу точно и убедиться, что хирург может видеть именно то, что они делают.
После анестезии крысы с 4%isoflurane, животное интубировано с помощью волоконно-оптического гусиного света для освещения трахеи. Вставьте катетер 16-го калибра в гортань и используйте холодное зеркало для наблюдения за конденсацией влажности в выдыхаемом дыхании от катетера для подтверждения итонации. Подключите крысу к аппарату искусственной вентиляции легких и поместите крысу под микроскоп в правом положении декубита на 37-градусную грелку По Цельсию.
Закрещите передние конечности лентой и используйте клиперы, чтобы побрить левую грудную клетку из-за передней ноги до конца грудной клетки. Очистите открытые кожи с тремя последовательными 10%povidone йода раствора и 70% этанола салфетки, и место пульс-оксиметр на ногу крысы для мониторинга сердечного ритма и насыщения кислородом на протяжении всей операции. Теперь отрегулируйте микроскоп и сосредоточьте хирургический вид.
Затем поместите стерильную драпировку над телом крысы и поднос для инструментов, чтобы создать стерильную среду. И, наконец, поместите стерильные инструменты на стерильный лоток инструмента. Для выполнения левой пневмонэктомии используйте ножницы Кули-Майо и ткани Джеральда, чтобы вырезать двух-три сантиметра отверстия в хирургической драпировке, и использовать хирургическое лезвие, чтобы сделать двухметровый боковой разрез в левой грудной клетке.
Используйте ножницы Кули-Майо, чтобы сократить каждый слой ткани до тех пор, пока ребра и межреберные мышцы подвергаются воздействию. Используйте комара, чтобы сделать отверстие через мышцы третьего межреберных пространстве. Используя двойной зонд, переместить легкие, чтобы визуализировать легочную артерию, и использовать McPherson-Vannas Iris ножницы, чтобы открыть межреберные мышцы примерно на один-два сантиметра шириной.
Поместите небольшой самоудержимый втягивающий в левую плевру, чтобы держать ребра и мышцы открытыми, и переместить левое легкое ниже в брюшной полости, чтобы обеспечить доступ к легочной артерии и бронхов. Для перевязки левого основного бронха и легочной артерии, во-первых, загрузить средний гемоклип в перевязку клип аппликатора и использовать Wangensteen атравматические миппы тщательно поднять верхнюю часть левого легкого подвергать легочной артерии. Закройте клип и аппликатор вокруг артерии, заботясь, чтобы не закрыть или разорвать левую вену azygos.
И открыть разрез далее с помощью миндалин, чтобы отделить мышечные волокна. После загрузки другого среднего гемоклипа в лигатинг клип аппликатор, использовать атрауматические жимы и стандартные ткани миппы, чтобы поднять нижнюю часть легкого из разреза, пока левый основной бронх и левой легочной вены визуализированы. Тщательно ligate левой основной бронхов и легочной вены вместе со вторым гемоклип, и использовать ножницы, чтобы удалить легкое без резки или разрыв клипа.
Затем используйте небольшой кусочек стерильной марли, чтобы поглощать любую кровь и остановить кровотечение. Используйте держатель иглы и 4-0 пролен шов, чтобы закрыть ребра и межреберные мышцы. Перед закрытием межреберных мышц вставьте катетер 16-го калибра в грудную полость вдали от хирургического разреза и в седьмое межреберное пространство и немедленно удалите иглу, оставив катетер на месте.
Поместите 5-0 шва в кожу и вокруг грудной трубки, так что, когда грудная трубка удаляется, отверстие будет связано закрыты, и связать швы, чтобы закрыть ребра. Закройте кожу и подкожное пространство с запуском 5-0 шва, и использовать три миллилитров шприца для эвакуации воздуха из плевральной полости через катетер, чтобы восстановить нормальное негативное давление в грудной клетке. Используйте держатель иглы, чтобы немедленно зажать катетер, чтобы предотвратить воздух от обратно в грудной полости.
Снимите катетер и завяжут шов, чтобы закрыть отверстие. В группе пневмонэктомии и монокроталина тяжелая легочная гипертензия развивается к 21-му дню, о чем свидетельствует повышение среднего давления легочной артерии по сравнению с контролем необработанных фиктивных животных. В пневмонэктомии плюс группа Sugen среднее давление легочной артерии в три раза выше, чем в контрольной группе.
Правое желудочковое систолическое давление также гораздо выше как у монокроталинов, так и у суген-обработанных животных, по сравнению с контрольной группой. В гематоксилин и эозин окрашенных нормальных крыс легочной ткани разделов, пространства между альвеолами и альвеолярных структур очевидны, и сосуды ясны и нормальной толщины. В легочной артерии гипертонии легких, есть признаки ремоделирования, утолщение стенок сосудов, сильное сужение сосудов, а также воспаление и координационный легочный артерит.
Зверь должен компенсировать потерю легкого, поэтому важно быть терпеливым в период восстановления. Мониторинг жизненно важных признаков и дать дополнительный объем кислорода или легких по мере необходимости. Сюген создает эндотелиальный апоптоз, который является клиническим соответствующим признаком легочной артериальной гипертензии.
Левая модель пневмонэктомии у грызунов проложила путь для ученых для изучения аномалий потока и разработки новых методов лечения легочной артериальной гипертензии. Благодаря использованию изофлюрана, сугена и/или MCT в этой модели, средства индивидуальной защиты должны носиться в обязательное время.
Грызунов левой пневмонэктомия — это ценный метод исследований легочной гипертензии. Здесь мы представляем протокол для описания процедуры пневмонэктомия крыса и послеоперационный уход для обеспечения минимальной заболеваемости и смертности.
Read Article
Цитировать это СТАТЬЯ
Katz, M. G., Fargnoli, A. S., Gubara, S. M., Bisserier, M., Sassi, Y., Bridges, C. R., Hajjar, R. J., Hadri, L. The Left Pneumonectomy Combined with Monocrotaline or Sugen as a Model of Pulmonary Hypertension in Rats. J. Vis. Exp. (145), e59050, doi:10.3791/59050 (2019).
Copy