Высокочувствительная измерение гломерулярной проницаемости у мышей с флуоресцеином изотиоцианат-полисукроз 70

Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области нефрологии о роли гломерулярной проницаемости при заболеваниях почек. Основным преимуществом этого метода является то, что небольшое и преходящее увеличение glomerular проницаемости обнаруживаются с помощью флуоресцентного свинца помечены трассировщик. После анестезии поместите мочевой катетер в женскую мышь.

Распоистить мышь в спинной лежачих. Затяните нижнюю часть живота и найдите уретриальный остий. Получить пластиковую часть катетера 22 G ангиокатетера и смазать его ксилокаин гель.

Используйте левый указательный палец, чтобы разместить тщательное напряжение на нижней части живота и ввести катетер три миллиметра в уретриальный остий, параллельно дистальной уретриальной оси. Поверните верхнюю часть ангиокатетера на 180 градусов, удерживая кончик в уретральном остии и поддерживая ось уретры. Затем ввимить катетер на семь миллиметров дальше в мышь, чтобы он был помещен в мочевой пузырь.

Поместите 1,5 миллилитров коричневой трубки поверх ангиокатетера для сбора мочи. Нанесите один миллилитр 0,9% хлорида натрия подкожно для повышения выработки мочи. Бритье шеи мыши и поместить его в лежачем положении с головой к хирургу.

Hyper расширить голову мыши с лентой. Дезинфицировать шею 70%изопропанолом. С помощью пинцета и ножниц сделать пять миллиметров кожи разрез ниже челюсти.

Вырежьте кожу примерно на один сантиметр в направлении грудины до середины грудины. Используйте ножницы. Тщательно рассекаете кожу на правую сторону шеи.

Сделайте прямоугольный разрез кожи справа, чтобы разоблачить мягкие ткани шеи. Будьте осторожны, чтобы не повредить яремную вену. Используйте ножницы и пинцет, чтобы исправить закрылки кожи с двумя зажимами.

Используя кончик тонкого пинцета, тщательно обнажайте яремную вену тупым препаратом. При необходимости удалите ткани мелкими ножницами. Избегайте повреждения ветвей вен.

Поместите и закройте лигатуру шелковой нитью в дистальной части видимой яремной вены, которая находится к голове мыши. Зафиксните шелковую нить лентой, чтобы поставить напряжение на лигатуру. Это обеспечивает небольшое напряжение на яремной вене.

Подготовьте лигатуру вокруг проксимальной части яремной вены. После этого заполните катетер раствором эквилибрации и синтеза. Зафиксить катетер лентой так, чтобы катетер выравнивает яремную вену.

Управление пузырьками, чтобы избежать эмболии воздуха. Поднимите яремную вену с помощью тонкого пинцета в месте вставки. Выровнять труб параллельно яремной вены и прокол яремной вены, направленных на люмен.

Вставьте примерно на два-четыре миллиметра параллельно оси яремной вены. Избегайте любых оживленных движений. Закройте лигатуру, чтобы починить катетер.

Контроль герметичности лигатуры путем тщательного просмотра через микроскоп. Положите влажный тампон над местом операции. Поместите хвост манжеты в нижней части хвоста мыши в то время как мышь лежит в спинной recumbency.

Запустите измерения и повторите их десять раз за точку времени. Если измерения артериального давления не кажутся правильными и производятся ложные данные, отрегулируйте положение хвостовой манжеты. Перед фазой эквилибрации измените трубку сбора мочи и поместите ее на лед.

Сложите тампон и положите его вокруг катетера небольшого сосуда, который вводится в яремную вену. Поместите зажим над тампоном, чтобы отменить ретроградный кровоток или эмболию воздуха. Подключите иглу 27 G с одним миллилитровый шприц заполнен FITC болюс к концу малого сосуда катетера.

Откройте зажим и нанесите 100 микролитров FITC bolus. Закройте зажим снова и соедините более большой катетер с более малым катетером. Вновь открыть зажим и начать шприц насос с скоростью потока 0,008 миллилитров в минуту.

Продолжайте настой в течение 60 минут. На этом этапе исследованы эффективные препараты по гломерулярной избирательности завивки. Изменение мочевой трубки форме времени точки нулевой минуты еще 1,5 миллилитров коричневой трубки.

Положите тампон вокруг катетера небольшого сосуда и отсоедините большой катетер от катетера малого сосуда. Заполните шприц экспериментальным фазовым раствором. Поместите его в шприц-насос и дайте насосу настой работать так, чтобы большой катетер был заполнен экспериментальным фазовым раствором.

Восстановите катетеры, избегая при этом эмболии воздуха и вновь открыв зажим. Запустите шприц-насос со скоростью потока 0,008 миллилитра в минуту. Продолжайте работать шприц насос в течение 60 минут и собирать мочу в мочевой трубке после этого.

Поместите трубку мочи на лед. В этом исследовании, флуоресценция сканирования родной мочи мыши показывает пик на 395 нанометров. Полисукола FITC 70 при концентрации 40 микрограммов на миллилитр в моче мыши показывает флуоресценцию максимум на 525 нанометров.

Моча мыши не нарушает измерение флуоресценции полисустрозы FITC 70. При приеме 525 нанометров повышение концентрации полисуцозы FITC 70 показывает повышенную интенсивность флуоресценции. Этот метод также способен обнаруживать различия в гломерулярной проницаемости.

Белые столбцы представляют уровни полисуцозы FITC 70 до начала стимуляции ангиотензина II в экспериментальной фазе. После дозы в течение 60 минут, гломерулярная проницаемость увеличилась по сравнению с контрольной группой. ангиотензин II вымывают снижение проницаемости гломерулярной.

Уровни полисуклезы FITC 70 снизились после дополнительных 60 минут стимуляции ангиотензина II или 60 минут вымывания ангиотензина II. Увеличение гломерулярной проницаемости из-за ангиотензина II может быть заблокировано блокатором рецепторов ангиотензина II. Кровяное давление, отслеживаемое методом хвостовой манжеты, не показывает существенных различий между контрольными и ангиотензиновыми II обработанными группами.

При попытке этой процедуры важно, чтобы избежать эмболии воздуха при изменении инфузионных решений.