В Vivo ингибирование микроРНК для уменьшения роста опухоли у мышей

Мы выполняем первую терапию, основанную на ингибиторе микроРНК в модели рака щитовидной железы. Эти развивающиеся методы лечения показывают перспективы для лечения этого заболевания. Этот тип ортопедической модели, используя системный маршрут доставки лечения, облегчает проверку новых препаратов на основе микроРНК.

Хотя мы используем ортопедическую модель для имплантации раковых клеток щитовидной железы человека в щитовидную железу мыши, все эти модели могут быть системными для других типов рака. Демонстрацией процедуры с Джулией Рамирес-Мойя и Адрианом Акуной будет Ракель Ароча Риеско. Она техник из нашего института.

После создания CAL-62 человека линии раковых клеток щитовидной железы неполной среде, приостановить 1 раз 10 до 6-й клеточной aliquot в 50 микролитров PBS при 4 градусах по Цельсию, и смешать клетки с равным объемом мембранной матрицы подвала. Загрузите клетки в 1 миллилитровый шприц, оснащенный 27-дюймовой иглой, и подкожно ввилит 100 микролитров образца в левый фланг 6-недельного иммунодефицитного клапана C обнаженной мыши. Через две недели после инъекции добавьте antagomiR или контролируемый буферный раствор для лечения до 160 микролитров реагента при доставке виво в 1 точке 5 миллилитровой трубки.

И сразу же вихрем раствор в течение 10 секунд, чтобы обеспечить сложность смеси. Инкубировать лечебный раствор в течение 30 минут при 50 градусах по Цельсию, а затем краткое центрифугирование в микро центрифуге. Затем разбавить осадочный комплекс обработки в шесть раз со свежим PBS и тщательного смешивания.

И вводить весь 200 микролитровый объем лечения непосредственно в опухоль. Впрыснуть 50 микролитров по 40 миллиграммов на литр подложки D-Luciferin раствор подкожно 2 раза в неделю, в каждое экспериментальное животное. Убедившись, чтобы подтвердить отсутствие реакции на боль в крайнем случае после изофлюран анестезии.

Поместите животное в камеру системы биолюминесценции in vivo и изображение сигнала биолюминесценции с помощью программного обеспечения для визуализации in vivo в соответствии со стандартными протоколами. Затем проанализируйте рост опухоли. Сравнение как методов лечения, так и определение значимости и различий в росте с помощью T-теста.

При ортопедической опухолевой клетке щитовидной железы приостанавливают алицит клеток CAL-62 в 5 микролитров PBS, а подкожно вводят 100 микролитров анальгетика и 100 микролитров антибиотиков в 7-недельный клапан C обнаженной мыши. Подтвердив недостаток реакции на щепотку нося, поместите животное под рассеченный микроскоп и дезинфицируете шею животного иодоповидоном. Затем сделайте примерно 2 сантиметра разреза кожи и вытесните слюнные головки, чтобы разоблачить шею.

Используйте миппы вскрытия, и / или ножницы, чтобы вскрыть мышцы ремня подвергать трахеи и щитовидной железы, и использовать 10 микролитра шприц, чтобы ввести 5 микролитра объем опухолевых клеток в правой доли щитовидной железы, расположенной на стороне крикоидного хряща. Когда все клетки были доставлены, изменить положение слюнных голов, и использовать шелк плетеные, покрытые, не поглощаемые швы, чтобы закрыть разрез. Затем нанесите иодоповидон на область раны и поместите мышь на термическое одеяло с наблюдением до полного выздоровления.

через две-три недели после инъекции интратиреоидных клеток, подготовить решение лечения, как попродемонстрировано, и доставить раствор внутривенно ретро-орбитальной инъекции венозной пазухи обезболивающего щитовидной опухолевого животного. В этом репрезентативном эксперименте рост опухолей внутритуморно вводили без ингибитора микроРНК 146B, был значительно подавлен в отношении отрицательного контроля. Уровни внутриопухонной экспрессии некоторых маркеров пролиферации также наблюдались на низких уровнях, в опухолях, обработанных antagomiR, по сравнению с контрольными опухолями.

Кроме того, восстановление микро-РНК целей могут быть изучены путем анализа опухоли извлечены РНК, или белка. Коллективно выявление того, что инвиво ингибирование отдельных микро РНК является эффективным и может быть использован терапевтически для лечения рака щитовидной железы. Гистологический анализ опухолей щитовидной железы, установленных у мышей, как было продемонстрировано, позволяет окрашивать эпителиальные клетки, окружающие опухоль, выявляя архитектуру фолликула щитовидной железы опухолевой ткани.

Примечательно, что внутривенная инъекция ингибитора микроРНК 146B в мышей, с установленной опухолью, приводит к значительному снижению объема опухоли по сравнению с контрольно-обработанных животных. Кроме того, экспрессия недавно описанной микроРНК 146B целевой DICER1 в первичной опухоли, увеличивается после анти микро-РНК 146B лечения, еще больше подчеркивая потенциал ингибирования неоднородной экспрессии микро-РНК и, следовательно, восстановление его целевых генов в качестве терапии рака щитовидной железы. Этот метод, и последующие результаты липина, открыть возможность изучения новых методов лечения на основе не-лечения РНК для лечения рака щитовидной железы.