Хронический протокол стресса иммобилизации для индуцирования депрессии, как поведение у мышей
15 мая 2019 г.
Данная статья предусматривает упрощенный и стандартизированный протокол для индукции депрессивного поведения у хронически обездвиженных мышей с помощью удерживающего. Кроме того, объясняется поведение и физиологические методы для проверки индукции депрессии.
Начните с установки комнаты для освещения в 200 люкс с помощью цифрового люкс метра. Поместите мышь в отдельную клетку по крайней мере за неделю до тестирования и поместите мышь в испытательный зал не менее чем за 30 минут до начала эксперимента. Аккуратно держите хвост мыши, чтобы избежать напрягая мышь, а затем аккуратно поместите его на шероховатую поверхность.
Накройте хеверитель небольшим белым полотенцем, а затем аккуратно поместите мышь на отверстие удержатель, так что мышь входит в хеверитель добровольно. Затем поместите замыкание, чтобы сдержать мышь как можно плотнее, будьте осторожны, чтобы избежать повреждений тела, таких как хвост, ноги и яички. Наконец, во время воздействия удержатель, мера массы тела и потребление пищи каждые 48 часов.
До тестирования, приучествовать мышей к присутствию двух бутылок питьевой, один из которых содержит 0,1 молярной сахарозы, а другой, содержащий простую воду в течение 48 часов. Переключитесь на позиции двух бутылок через 24 часа, чтобы уменьшить любые путаницы, производимые боковым уклоном. На третий день лишают мышей воды на сутки.
Затем в день эксперимента мышей выставляют на две бутылки для питья в течение шести часов. Через три часа переключитесь на бутылки с водой. Завещайте объем в миллилитров раствора сахарозы и потребляемой воды, а затем вычисляйте сродство животного к сахарозе.
Наконец, вычислить предпочтение сахарозы в процентах от объема потребления сахарозы над общим потреблением жидкости во время теста. Начните с чего хроническое ограничение стресса индуцированных мышей в испытательном зале по крайней мере за 30 минут до начала теста подвески хвоста. Установите свет комнаты для тусклых условий на 50 люкс.
Далее поместите камеру примерно в 40 сантиметрах от мыши. Подостановить мышь твердо от горизонтальной полосы с помощью клейкой лентой. После того, как мышь расположена в середине окна подвески начать запись, и наблюдать поведенческие изменения непрерывно в течение шести минут.
Если мышь пытается подняться хвостом использовать палку или подняться пробку, чтобы предотвратить это. В конце эксперимента перемести мышь в домашнюю клетку и аккуратно снимите ленту с хвоста. Наконец, используйте программное обеспечение для отслеживания видео для анализа накопленного времени неподвижных периодов.
Результаты указывают на снижение массы тела для группы стран СНГ и значительно меньшее потребление пищи в четвертый день. По сравнению с контролем, было показано снижение предпочтений сахарозы в группе СНГ, в то время как было значительное увеличение времени неподвижности и кортикостерона. Кроме того, глутамин дополняет диету амелиорирует депрессивные, как поведение, как показано на вес тела, потребление пищи, предпочтения сахарозы, неподвижность, и кортикостерон.
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео
Обзор
В данной статье представлен стандартизированный протокол индукции депрессивноподобного поведения у мышей при хронической иммобилизации с использованием фиксатора. Подробно описаны поведенческие и физиологические методы подтверждения развития депрессии.
Основные компоненты исследования
Область науки
- Нейробиология
- Поведенческая наука
- Животные модели депрессии
Теоретические основы
- Депрессия является серьезной проблемой в области психического здоровья.
- Животные модели необходимы для изучения механизмов развития депрессии.
- Хроническая иммобилизация — распространенный метод индукции депрессивно-подобного поведения.
- Стандартизированные протоколы повышают воспроизводимость и достоверность результатов.
Цель исследования
- Представить четкий протокол индуцирования депрессивно-подобного поведения у мышей.
- Описать методы подтверждения индуцирования депрессии.
- Способствовать проведению исследований в области депрессии с использованием моделей на животных.
Используемые методы
- Установка освещенности в тестовой среде на уровне 200 lux.
- Раздельное содержание мышей для акклиматизации.
- Использование фиксатора для индуцирования иммобилизации.
- Мониторинг массы тела и потребления корма каждые 48 часов.
Основные результаты
- Успешное индуцирование депрессивно-подобного поведения у мышей.
- Поведенческие изменения, наблюдаемые в период иммобилизации.
- Физиологические показатели, коррелирующие с поведенческими результатами.
- Протокол продемонстрировал воспроизводимость в различных сериях опытов.
Выводы
- Данный протокол эффективен для индуцирования депрессивно-подобного поведения.
- Поведенческие и физиологические методы валидированы для исследований депрессии.
- Данная работа вносит вклад в понимание механизмов депрессии на моделях животных.
Часто задаваемые вопросы
Практическая значимость для отрасли
Хронический иммобилизационный стресс (ХИС) представляет собой масштабируемую, обоснованную с точки зрения механизмов модель для индукции депрессивно-подобных фенотипов у мышей, что способствует валидации мишеней при поиске нейропсихиатрических лекарственных средств. Благодаря сочетанию поведенческих показателей (предпочтение сахарозы, тест подвешивания за хвост) с физиологическими биомаркерами (кортикостерон), данный протокол позволяет снизить механистические риски при выборе мишеней ЦНС посредством фенотипического скрининга в системе, релевантной заболеванию. Такой подход повышает прогностическую достоверность на ранних этапах разработки, связывая молекулярные вмешательства с валидированными поведенческими и нейроэндокринными результатами.
Стратегическое применение в биофармацевтических исследованиях и разработках
Ранний поиск и валидация мишени
- Научная ценность: позволяет проверять терапевтические гипотезы, касающиеся модуляции путей стрессового ответа и депрессивной симптоматики.
- Практическая ценность: обеспечивает функциональную валидацию мишеней посредством количественной оценки изменений в предпочтении сахарозы и поведении в виде иммобильности.
- Прогностическая ценность: облегчает сортировку портфеля соединений путем корреляции их эффектов с обращением поведенческого и физиологического дефицита, вызванного CIS.
Скрининг и разработка анализа
- Готовность анализа: Подготовка валидированных биологических систем для последующего скрининга соединений с использованием стандартизированной индукции стресса.
- Количественные результаты: Получение воспроизводимых мультимодальных показателей (поведенческих, гормональных), подходящих для стандартизации анализа.
- Масштабируемость: Возможность повторного использования платформы в программах по изучению ЦНС благодаря минимальным требованиям к оборудованию и четко определенным конечным точкам.
Трансляционные и доклинические исследования
- Значимость для изучения заболевания: Моделирует депрессивно-подобные состояния с лицомной валидностью через ангедонию (снижение предпочтения сахарозы) и поведенческое отчаяние (повышение иммобильности).
- Трансляционная преемственность: Связывает модуляцию мишени на этапе поиска с доклинической валидацией с помощью консервативных биомаркеров стрессового ответа.
- Решения с учетом рисков: Позволяет определить критерии принятия решения о продолжении или прекращении исследований (go/no-go) на основе нормализации уровня кортикостерона и поведенческих конечных точек.
Интеграция конвейеров и рабочих процессов
Протокол CIS вписывается в континуум открытий: от проверки гипотез о мишенях через идентификацию перспективных соединений до оценки доклинической эффективности, особенно для соединений, модулирующих работу ЦНС.
- Открывающая биология: позволяет проверять гипотезы о нейроактивных соединениях путем индуцирования воспроизводимого фенотипа стресса.
- Скрининг: обеспечивает готовность анализа за счет стандартизированной иммобилизации и установления стабильного базового уровня.
- Аналитика: предоставляет количественные зависимые переменные (% предпочтения сахарозы, продолжительность иммобилизации, уровень кортикостерона ng/mL) для межгруппового сравнения.
- Трансляционные исследования: соответствует требованиям доклинической валидации посредством измеримого обращения стресс-индуцированных биомаркеров и поведенческих реакций.
- Корпоративное использование: служит многофункциональной фенотипической платформой для исследования различных классов мишеней при депрессии.
Операционное и корпоративное воздействие
- Научная ценность: Повышает прогностическую достоверность за счет уменьшения механистической неопределенности при воздействии на мишени в ЦНС.
- Операционная ценность: Обеспечивает стандартизацию и воспроизводимость между лабораториями благодаря определенным интервалам воздействия стресса и проведения измерений.
- Стратегическая ценность: Повышает эффективность использования капитала, позволяя на ранних этапах снизить риски, связанные с нейропсихиатрическими мишенями.
- Влияние на портфель: Поддерживает приоритизацию с поправкой на риск на основе профилей поведенческого и физиологического восстановления.
Особенности реализации
- Требуется опыт работы с грызунами, проведение поведенческого тестирования и знание физиологии стресса.
- Необходим инструментарий для мониторинга освещенности, видеотрекинга, а также проведение ИФА или эквивалентного метода определения уровня кортикостерона.
- Требуется стандартизация использования фиксаторов, расположения поилок и времени проведения тестов между разными исследовательскими группами для снижения вариабельности.
- При переходе к другим линиям мышей или изменению продолжительности стресса необходимо учитывать особенности адаптации.
- Практические ограничения включают вариабельность восприимчивости к стрессу и необходимость использования контролей привыкания для изоляции эффектов иммобилизации.
