Флуоресценция Ангиография для оценки перфузии аневризмы и родительской артерии Патентия в Крыса и Кролик Аневризмы Модели
24 июля 2019 г.
Мы представляем протокол для эффективной оценки перфузии аневризмы и патологии паряточной аневризмы у крыс и кроликов, используя флуоресцентную видео-ангиографию на основе флуоресценции (FVA). При положительной прогностической стоимости 92,6%, это простой, но очень эффективный и экономичный метод без специального оборудования требуется.
Этот метод является надежным и простым методом визуализации кровотока в реальном времени в аневризмах и сосудах и может быть использован в различных моделях животных. Основным преимуществом этого метода является то, что он облегчает визуализацию кровотока во время операции, не требуя каких-либо дорогостоящих устройств или обширной хирургии. Перед началом процедуры используйте черную ленту для защиты зеленого фильтра полосы, чтобы выступать в качестве фильтра возбуждения на фонарик.
И убедитесь, что фонарик излучает только синий свет. Оснастить камеру зеленым фильтром для диапазона, чтобы функционировать в качестве фильтра излучения света. Только зеленый свет теперь должен быть в состоянии пройти.
Затем дезинфицировать рабочее пространство дезинфицирующим раствором и накрыть стол стерильными шторами для предотвращения загрязнения. Для выполнения флуоресцентной видеоангиографии или FVA у кролика подтверждают, что обезболивающее животное не реагирует на болевые стимулы перед позиционированием кролика в положении лежа. Бритье шеи вокруг стерноклидомастоих мышц.
Сосредоточьте камеру на вскрытой артерии и используйте алюминиевую фольгу, чтобы покрыть пятими миллилитровый шприц, содержащий 100 миллиграммов/миллилитр флуоресцентного натрия. Выключите свет как можно больше и ввините 0,3 миллилитров/килограмм флуоресцентного натрия внутривенно в инъекционный порт катетера. Затем смой шприц с 0,5 миллилитров солевого раствора, чтобы убедиться, что все краситель был введен.
И немедленно осветите хирургическое поле модифицированным фонариком. Как только свет включен, начните снимать с помощью модифицированной камеры. Поток крови должен быть виден в течение нескольких секунд после инъекции.
Для макроскопического анализа сосуда после ангиографии проводится ресект аневризма и комплекс родительских артерий у последующих животных, либо выполняется визуальное подтверждение течения путем наблюдения за заполнением аневризмы и/или шунтированием после удаления временных зажимов. В этом репрезентативном исследовании, FVA удалось выработать в восьми из 10 кроликов. Из 16 аневризм, выявленных у восьми кроликов, две аневризмы продемонстрировали стойкую перфузию родительской артерии, в то время как ФВА выявила пять случаев с остаточной перфузией.
14 аневризм кролика не проявляли остаточной перфузии макроскопически, в то время как 11 были впоследствии обнаружены с помощью FVA. Остаточная перфузия наблюдалась макроскопически у 23 из 48 крыс, а остальные 25 крыс не проявляли макроскопических признаков остаточной перфузии. 22 из 23 аневризм без макроскопической перфузии были затем подтверждены с помощью FVA.
В целом, 25 из 27 кроликов и крыс комбинированных случаях может быть подтверждено, в результате чего положительное прогностический значение 92,6% чувствительность ставка 100%и специфика 94,1%Наиболее важные вещи при попытке этой процедуры, чтобы вскрыть сосуды должным образом и работать в затемненной комнате при введении и визуализации фтора. Эта процедура может быть использована в любой модели животных для оценки кровотока в любом видимом сосуде.
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео
Обзор
В данной статье представлен протокол оценки перфузии аневризмы и проходимости сосудов с использованием флуоресцентной видеоангиографии (ФВА) на основе флуоресцеина на моделях животных (крыс и кроликов). Метод характеризуется высокой прогностической значимостью положительного результата (92,6%); также подчеркиваются его простота и экономическая эффективность, поскольку он не требует специального оборудования.
Основные компоненты исследования
Область науки
- Нейробиология
- Биология сосудов
- Флуоресцентная визуализация
Введение
- Аневризмы создают значительные клинические трудности в плане оценки перфузии.
- Существующие методы могут требовать дорогостоящего оборудования и проведения обширных хирургических процедур.
- Флуоресцеиновая видеоангиография обеспечивает решение для визуализации в режиме реального времени.
- Примечательна универсальность данного метода применительно к различным моделям животных.
Цель исследования
- Разработать надежный метод визуализации кровотока в аневризмах.
- Оценить проходимость сосудов без необходимости использования дорогостоящего оборудования.
- Предоставить простой протокол, который может быть широко внедрен в исследовательскую практику.
Используемые методы
- Основной платформой была флуоресцентная видеоангиография (FVA).
- В качестве животных использовали крыс и кроликов, в частности, для оценки кровотока во время и после операции.
- Мультиомиксные рабочие процессы не упоминались.
- Процедура включала анестезию животных, подготовку операционного поля, введение флуоресцеина натрия и использование модифицированной системы камер.
- Ключевые этапы включали обеспечение минимального освещения при визуализации и точное соблюдение времени захвата изображений после инъекции.
Основные результаты
- Метод позволил успешно визуализировать кровоток у 8 из 10 кроликов и выявить значимые случаи остаточной перфузии.
- Из 16 оцененных аневризм 11 были обнаружены с помощью FVA, но не были выявлены при макроскопическом исследовании.
- У крыс остаточная перфузия была подтверждена в 22 из 23 аневризм при отсутствии видимых макроскопических признаков.
- В целом, использование FVA подтвердило наличие перфузии в 25 из 27 общих случаев.
Выводы
- Данная процедура демонстрирует высокую эффективность в оценке кровотока при аневризме.
- Применение FVA облегчает хирургическую визуализацию в режиме реального времени и оценку статуса перфузии.
- Результаты способствуют улучшению понимания и совершенствованию методов оценки сосудистых патологий в исследовательских условиях.
Часто задаваемые вопросы
Значимость для промышленности
Флуоресцентная видеоангиография (ФВА) представляет собой недорогой метод, не требующий специального оборудования, для оценки перфузии аневризмы и проходимости родительской артерии в режиме реального времени на доклинических моделях. Высокая чувствительность и специфичность метода обеспечивают надежное обнаружение остаточной перфузии, что позволяет на ранней стадии выявить неполную окклюзию в моделях аневризмы. Данная возможность способствует снижению механических рисков при проведении сосудистых вмешательств, предоставляя количественные и воспроизводимые данные для доклинической оценки эффективности устройств и хирургической техники.
Стратегическое применение в биофармацевтических исследованиях и разработках
Первичный поиск и валидация мишени
- Научная ценность: позволяет проверять терапевтические гипотезы путем визуализации динамики кровотока в моделях аневризмы.
- Практическая ценность: обеспечивает функциональную валидацию мишеней посредством прямой оценки перфузии в реальном времени без использования дорогостоящего оборудования для визуализации.
Скрининг и разработка анализа
- Научная ценность: обеспечивает количественные бинарные результаты перфузии (есть/нет), которые могут быть стандартизированы для различных исследований.
- Практическая ценность: упрощает подготовку анализа за счет простой инъекции флуоресцеина и использования модифицированной установки с фонариком и камерой, что способствует воспроизводимости результатов.
Трансляционные и доклинические исследования
- Научная ценность: связывает стадию открытия с доклинической валидацией путем подтверждения окклюзии аневризмы и целостности родительской артерии у крыс и кроликов.
- Практическая ценность: предоставляет переносимый показатель перфузии, который соответствует клиническим конечным точкам для оценки лечения аневризмы.
Интеграция конвейеров и рабочих процессов
FVA вписывается в континуум процесса разработки — от ранней валидации моделей до доклинической оценки, обеспечивая данные на основе перфузии, которые позволяют принимать решения о целесообразности дальнейших исследований до этапа оптимизации ведущих соединений.
- Поисковая биология: Поддерживает проверку гипотез, выявляя остаточную перфузию, которая может указывать на неэффективность лечения в моделях аневризмы.
- Скрининг: Обеспечивает стандартизированную, воспроизводимую оценку проходимости сосудов у нескольких животных и в разных временных точках.
- Аналитика: Позволяет получать четкие показатели перфузии (макроскопические и подтвержденные методом FVA), что дает возможность сравнивать контрольные и экспериментальные группы.
- Трансляционные исследования: Связывает доклинические данные о перфузии с клинической значимостью путем подтверждения окклюзии в анатомически релевантных моделях аневризмы.
- Корпоративное использование: Представляет собой независимый от платформы и доступный метод, применимый в различных программах исследований сосудов.
Операционное и корпоративное влияние
- Научная ценность: Повышает прогностическую достоверность моделей аневризмы за счет выявления перфузии, которую невозможно обнаружить при макроскопическом осмотре.
- Операционная ценность: Требует только флуоресцеиновый натрий, фонарик и фильтры для камеры, что позволяет осуществлять недорогое и высокопроизводительное применение.
- Стратегическая ценность: Снижает биологические риски в доклинических программах за счет повышения точности оценки окклюзии.
- Влияние на портфель: Обеспечивает приоритизацию вмешательств при аневризмах с учетом рисков на основе подтвержденных результатов перфузии.
Особенности реализации
- Требуется опыт в области микрохирургического препарирования сосудов и работы с моделями аневризмы.
- Необходимо наличие затемненного помещения и модифицированного фонарика с синим возбуждающим и зеленым эмиссионным фильтрами.
- Требуется стандартизация дозировки флуоресцеина (0.3 mL/kg) и промывание физиологическим раствором для получения стабильного сигнала.
- Необходимо учитывать особенности адаптации для сосудов разных размеров и анатомические особенности конкретных видов.
- Метод ограничен поверхностными или доступными сосудами из-за зависимости от проникновения внешнего света.
