Метод Ex Vivo для оценки спонтанной подвижности репродуктивных путей мыши и алгоритмотслеживания движения uterus на основе MATLAB для анализа данных

Наш протокол имеет важное значение, поскольку он обеспечивает первый количественный метод ex vivo для оценки спонтанной подвижности нетронутой матки. Этот новый подход обеспечивает легкую и менее дорогую альтернативу для тестирования релаксант потенциал естественных средств правовой защиты в синтетических соединений. Основным преимуществом этого метода является то, что все внутриматочные клеточные взаимодействия остаются нетронутыми на протяжении всего эксперимента.

Над контрактурности uterus связан с dysmenorrhea, для которого утробные relaxants могут быть полезны для обработки. Этот метод обеспечивает простой способ тестирования новых релаксантов. После подтверждения стадии цикла эструса поместите мышь в положение на спине и распределит конечности, чтобы разоблачить область таза брюшной полости.

Влажный живот с 70% этанола, и использовать типсы, чтобы тщательно поднять кожу выше клитора. Сделайте небольшие поперечные разрезы на боковой части нижней части брюшной полости до верхних конечностей, чтобы разоблачить брюшной полости. Тщательно прорезать брюшной полости подвергать желудочно-кишечного тракта, не повреждая рога матки, и использовать миппы для удаления фасции и жировой ткани, покрывающей желудочно-кишечного тракта.

Удалите двенадцатиперстную кишку, джеджунум, илеум, цикум, а также восходящую и поперечную толстую кишку. Найдите мочевой пузырь, чтобы найти влагалище, которое находится непосредственно под мочевым пузырем. Найдите лобковой симфизии при слиянии лобковых костей, caudal к мочевому пузырю, и использовать ножницы, чтобы тщательно сделать разрез на боковых сторонах лобковой симфизии через межпраковые фиброкартилягинные ткани, чтобы получить доступ и обеспечить маршрут для извлечения влагалища.

Вырезать через промежь, расположенный между анусом и нижней части вульвы, и использовать миппы, чтобы поднять влагалище, чтобы медленное иссечение прямой кишки. Определите два рога матки, которые раздвоение в вилку rostrally во влагалище и найти запутанный яйцеклетки и яичников в конце каждого рога. Правильное определение рога матки имеет решающее значение для процедуры, чтобы обеспечить ткани не повреждены.

Используйте небольшие ножницы для вскрытия любых связок, которые соединяются и поддерживают рога, яйцеклетки и яичники в брюшной полости, а также удалить влагалище, матку, яйцеклетки и яичники. Перенесите весь изолированный репродуктивный тракт в 100-миллиметровую чашку Петри, содержащую 10 миллилитров PBS Дульбекко. Используйте типсы и хирургические ножницы, чтобы удалить любые соединительной и жировой ткани, окружающие рога матки и влагалища, а также любой мех в лобковой области, которые могут помешать качеству изображения.

Удалите широкую связку, чтобы позволить подвижность рога матки и мыть ткани два раза со свежимИ PBS Дульбекко за стирку перед передачей изолированного репродуктивного тракта в 35 миллиметров Петри блюдо, содержащее три миллилитров кислородом Krebs решения. Для спонтанной подвижности изображения, поместите чашку Петри на черной поверхности при комнатной температуре, и позволяют от 15 до 30 минут для спонтанных сокращений, чтобы начать. Когда движение можно наблюдать, записывают спонтанную подвижность матки в течение 10 минут с ося плоскости с помощью любого типа цифрового видеооборудования.

Затем перенесите препарат в чашку Петри, содержащую кислородный буфер Кребса, дополненный тестовым соединением, и замитв спонтанную подвижность матки еще на 10 минут таким же образом. В конце периода записи, мыть весь репродуктивный тракт в 10 миллилитров PBS Дульбекко в 100 миллиметров Петри блюдо, и передать образец в новую чашку Петри свежеоксигенированных Кребс буфер для оценки обратимости лечения. Запись спонтанной подвижности матки в течение примерно 10 минут таким же образом, как и для последних двух записей.

Затем перенесите препарат еще на 35-миллиметровую чашку Петри, наполненную кислородом буфера Кребса, дополненного транспортным средством для испытательного соединения, чтобы гарантировать отсутствие механически индуцированных изменений в спонтанной подвижности матки. Препарат репродуктивного тракта проявлял высокую подвижность в панелях А и С при отсутствии эпинефрина. Но этот фенотип дремлет в панели B с наличием одного микро мюллера эпинефрина.

Здесь показан анализ выборочных данных введения эпинефрина и спонтанного восстановления подвижности, иллюстрирующий, как влияние гормона на спонтанную подвижность репродуктивного тракта может быть количественно из записей ткани, сделанных до, во время и после лечения соединения теста. Важно, чтобы избежать сжатия или перенапряжения рога матки в противном случае не спонтанной контрактности не будет соблюдаться. Наш метод также может быть использован для тестирования соединений, которые могут увеличить сотычность матки.

Эта процедура может быть применена к беременной мыши матки на ранних стадиях беременности. Этот эксперимент имеет потенциал, чтобы быть повышен до шести хорошо пластины формат для пропускной способности скрининга наркотиков.