Полевой посмертный бешенство Быстрый иммунохроматографический диагностический тест для ресурсно-ограниченных настроек с дальнейшим молекулярным применением

Этот протокол может быть использован для посмертной диагностики бешенства животных от первоначального зрения дикции в поле до молекулярной конформации в централизованном уровне активности. Быстрое иммунохроматографическое тестирование диагностики является полезной альтернативой сельским и сельским особенностям в Африке и Азии, в которых нет справочных материалов для диагностики бешенства. Демонстрация процедуры будет Саймон Бонас техник из моей лаборатории.

Демонстрацией первой части процедуры будет Ибрагима Дико, техника из Центрального ветеранского центра Лабатуара в Бамако, Мали. Чтобы получить доступ к foramen magnum, используйте нож, чтобы удалить голову животного перед первыми шейными позвонками. И использовать соответствующий инструмент для сбора образца ствола мозга.

Такие, как одноразовые пипетки, питьевой соломы, зажим, или капельницы, как показано здесь. Ствол мозга затем хорошо видны, как попродемонстрировано здесь с кончиком этой пипетки. Используйте соответствующий инструмент для сбора части этого ствола мозга, таких как питьевая солома.

Вставьте его осторожно и поверните осторожно, чтобы собрать ткани мозга. Не забудьте подключить соломинку пальцем, прежде чем удалить его, для того, чтобы собрать биопсию. Также возможно использование зажима.

Для того, чтобы собрать большие кусочки ствола мозга на уровне foramen magnum. Кроме того, можно использовать непосредственно капельницы, предусмотренные в комплекте для сбора ствола мозга. Подобно питьевой соломы, вставьте капельницы тщательно при нажатии и повернуть осторожно, чтобы собрать ткани мозга.

Затем аспирировать ткани мозга и поместить его в контейнер, как пробка трубки. Для точного диагноза очень важно собрать ствол мозга, который содержит medulla ablongata, во время сбора образцов. Тщательно раздавить мозговой материал непосредственно в трубке, содержащей буфер с тампоном или капельницы в течение 30 секунд, пока однородная подвеска не будет получена.

Используя капельницы, внести четыре капли около 100 микролитров подвески в образец вход на испытательном устройстве. В случае задержки из-за высокой вязкости подвески или для ускорения начала миграции, аккуратно поцарапать дно места депозита устройства капельницы. Подождите полную миграцию образца за одну-пять минут до прочтения тестового устройства.

Образец считается положительным для бешенства, когда две линии видны. Отрицательно, если присутствует только линия управления. И недействительными, если видна только тестовая линия или нет линий.

Чтобы извлечь РНК из образца устройства, аккуратно откройте устройство и удалите фильтровальную бумагу. Соберите площадь депозита образца и поместите образец в один миллилитр триреагентных LS. После одного часа при комнатной температуре с регулярным нежным ручным возбуждением, извлекайте РНК из трубок супернатантов в соответствии со стандартными протоколами извлечения РНК. Добавление двух микролитров гликогена для облегчения осадков РНК в соответствии с рекомендациями производителей.

Отрегулируйте окончательный объем повторного незаменимости РНК до 50 микролитров с нуклеазной свободной водой. И подготовить мастер смесь реакции решение для трех различных обратных транскриптазы количественных анализов ПЦР в соответствии с таблицей. Использование грунтовок и зондов, как указано в таблице.

На пяти микролитров разбавленной РНК образцов. И 15 микролитров мастер-микса к каждому из трех различных анализов в дубликате в соответствующих 96 хорошо реакционной пластины. Добавьте соответствующий положительный и отрицательный контроль для каждого анализа к каждой пластине в дубликате.

Затем запустите различные анализы после термальных условий езды на велосипеде, как указано в таблице. Результаты могут быть проанализированы, как указано в таблице. Сбор биопсии мозга как можно проще, чтобы гарантировать сбор высококачественных образцов.

По сравнению с эталонной техникой чувствительность и специфичность экспресс-иммунохроматографического диагностического теста была высокой во всех лабораториях, использующих эти протоколы. Исходя из совокупного количества проверенных образцов, общая чувствительность и специфичность составили более 95%Быстрый иммунохроматографический диагностический тест подходит для обнаружения лизавируса в биопсии мозга у инфицированных животных. Однако, поскольку уровень лизавирусных антигенов имеет важное значение для диагностики бешенства, предел обнаружения остается высоким при тестировании титрированных вирусных суспензий.

В этих репрезентативных результатах, полученных после обнаружения РНК двойным комбинированным панлисавирусом обратной транскриптазы количественного ПЦР ориентации вирусной полимеразы лизавируса, была проведена группа из 51 положительного экспресс-иммунохроматографического диагностического теста. Кроме того, генотипирование может быть выполнено для четырнадцати образцов с использованием геми-гнездо pcR ориентации частичного гена нуклеопротеина. Диагностика и извлечение для тест-полоски для генотипирования на основе после RT PCR, или для дополнительного длинного анализа строки.

Быстрый иммунохроматографический тест на диагностику может обеспечить быструю и точную диагностику бешенства. Что имеет решающее значение для поддержания волновой функции в системах непрерывного волнового наблюдения и управления. И свести к минимуму человеческие жизни.