14 июля 2021 г.
Здесь мы описываем пошаговый протокол хирургического деформирования аорты в хорошо зарекомендовавшей себя мышиной модели сужения аорты. Эта процедура не только позволяет изучить механизмы, лежащие в основе обратного ремоделирования и регрессии гипертрофии левого желудочка, но и протестировать новые терапевтические варианты, которые могут ускорить восстановление миокарда.
Дебандинг аорты является полезной экспериментальной моделью для изучения обратного ремоделирования миокарда у грызунов и для получения нового понимания механизмов регрессии кардиомиоцитов и функционального восстановления изолика. Этот металл облегчает эволюцию обратного моделирования критики в VIVO и сбор биологических образцов для in-vitro и молекулярных исследований в разные моменты времени во время прогрессирования заболевания. Данная методика имитирует прогрессирование ремоделирования миокарда и обратного ремоделирования и позволяет исследовать механизмы неполного восстановления миокарда.
Этот протокол дает представление о механизмах и линии полного и неполного обратного ремоделирования миокарда при хронических патологиях, связанных с перегрузкой давления, таких как преднатяжение глаз или стеноз аорты. Подключите оротрахеальную трубку к вентилятору, чтобы инициировать механическую вентиляцию и отрегулировать вентилятор до частоты 160 вдохов в минуту и приливного объема 10 миллилитров на килограмм. Перед началом процедуры бандажа подтвердите отсутствие реакции на болевой рефлекс у шести-восьминедельной мыши C57 black six, побрейте и нанесите крем для депиляции от линии шеи до среднего уровня груди мыши и нанесите мазь на глаза животного.
Поместите ректальный зонд и оксиметр для контроля температуры оксигенации крови и частоты сердечных сокращений. Поместите мышь в правый боковой пролежне на грелку и приклейте конечности к системе втягивания магнитного фиксатора, чтобы поддерживать животное в правильном положении во время процедуры. Затем продезинфицируйте грудную клетку последовательными 70% спиртовыми и повидон-йодными растворами скрабами, затем и вскройте мышцы кожи и ребра, чтобы выполнить полосу на аорту.
В конце процедуры наносят раствор повидона-йода на участок шва кожи и вводят анальгезию дважды в день в течение двух-трех дней, затем вводят стерильный физиологический раствор внутрибрюшинной леа для предотвращения обезвоживания в случаях значительного кровотечения во время операции и помещают животное в инкубатор с наблюдением до полного выздоровления. Через семь недель после операции по бандажекции аккуратно рассекли к тканям, спайку и фиброз вокруг аорты у половины полосатых животных, пока сужение не станет видимым. Аккуратно рассеките аорту и отделите шов от сосуда, затем с помощью ножниц разрезайте шов.
Обратите внимание, что длительная окклюзия воды индиго во время связывания или демоническая может привести к отеку легких, чрезмерной активации воспалительных путей. Закройте грудную стенку простым прерывистым или непрерывным шестью старыми полипропиленовыми швами, используя минимально возможное количество швов, и закройте кожу полипропиленовым швом из шести шелка O в непрерывном шовном рисунке, затем выполните послеоперационный уход, как показано. Каждые две-три недели после операции удаляют мех от линии шеи до уровня средней части груди, как показано на бумаге, и помещают животное на грелку в положении лежа на спине Поместите электроды ЭКГ на открытую кожу и подтвердите наличие хорошего следа ЭКГ и частоты сердечных сокращений от 300 до 350 ударов в минуту.
Следите за температурой и наносите эхо-гель на область грудной клетки. Поместите мышей в дорсальную лежачую часть, слегка повернутую вправо, и запустите эхокардиограф с помощью соответствующих настроек. Затем поместите ультразвуковой зонд над грудной клеткой и оцените градиент давления через аорту.
Запишите двухмерные управляемые изображения аорты, показывающие наличие или отсутствие восходящего сужения аорты, чтобы анатомически визуализировать эффективность полосирования и де-полосирования. Чтобы оценить гипертрофию, поместите зонд на короткую ось левого желудочка на уровне сосочковой мышцы и нажмите кнопку отслеживания режима, чтобы визуализировать переднюю стенку левого желудочка, диаметр левого желудочка и заднюю стенку левого желудочка в диацетиле и систолах. Затем оценивают систолическую функцию и вычисляют фракцию выброса и дробное укорочение по стандартным протоколам.
Чтобы оценить диастолическую функцию, определите пик постволновой допплерографии ранней и листовой митральной скорости потока с использованием атипичного четырехкамерного вида чуть выше митральных листочков и запишите боковые митральные кольцевые миокардиальные ранние диастолические и пиковые систолические скорости с использованием посттацетной допплерографии и апикального четырехкамерного вида. Успех сужения аорты можно проверить по повышенному левому желудочку и систолическому давлению. А по доплеровской аортального течения скорости более 2,5 метров в секунду.
По сравнению с животными, прооперированными Sham, гипертрофия левого желудочка, вызванная изгибом, демонстрируется увеличением массы левого желудочка и нарушением диастолической функции, о чем свидетельствуют более высокие давления наполнения и диастолическое давление на конце левого желудочка. Гистологически семь недель полосатости аорты вызывают значительную гипертрофию кардиомиоцитов и фиброз. У меня подвергается дебандирование, так как успешное удаление аортального стеноза может быть подтверждено эходоплеровскими скоростями.
Общая дебандирование способствует значительному снижению послегрузок и гипертрофии левого желудочка, оцениваемой массой ЛЖ. Более того, наблюдается нормализация диастолической функции. Когда вы играете в нее осторожно, избегайте длительного этического сговора, чтобы гарантировать, что оксигенация крови остается выше 90%Эта минимальная модель позволяет нам изучать мое ремоделирование сердца и обратное ремоделирование в разные моменты прогрессирования заболевания и даже будить самые нерегулируемые пути в каждый момент времени.
Данная процедура позволяет оценить терапевтический потенциал перспективных препаратов, а также изучить влияние ряда сопутствующих заболевания на обратное ремформирование и восстановление миокарда.
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео
Эта статья представляет протокол для хирургического дебандирования аорты в модели аортального сужений у мыши. Эта техника облегчает изучение обратного ремоделирования левого желудочка и испытание новых терапевтических вариантов для восстановления миокарда.
The aortic banding/debanding model enables mechanistic de-risking of therapeutic strategies targeting myocardial reverse remodeling in pressure overload conditions. By recapitulating clinical scenarios of afterload reduction, such as aortic valve replacement, the model supports target validation and predictive confidence in early discovery. It provides a disease-relevant system to assess regression of hypertrophy and recovery of diastolic function, informing portfolio triage and lead identification.
The method integrates into the discovery continuum from target validation through lead identification to preclinical efficacy testing, supported by longitudinal functional and structural assessments.