Изоляция intact глазного яблока для получения интегральной глазной поверхностной ткани для гистологического обследования и иммуногистохимии

Наша лаборатория фокусируется на развитии глаз и заболеваний. Этот протокол описывает метод для удаления черепа и орбитальных костей последовательно из расчлененной головы мыши. Оставляя веки, глазную поверхность, хрусталик и сетчатку все вместе в один кусок. Протокол пойдет на пользу офтальмологам, которые интересуются окулярной поверхностной дидактикой. Я Dianlel Го, чтобы сказать технику с вероятной борьбы при попытке избежать повреждения глазного яблока, в то время как вскрытие лицевых костей. Основным преимуществом этого вскрытия является то, что целостность эпителиального листа глазной поверхности хорошо сохранилась и различные части глазной поверхности могут быть изучены гистологией или иммуностелением в одном разделе. Обязательно отрежьте все мелкие кости и обломки мягких тканей. Причина, это вызовет шрамы на участке ткани в противном случае. После усыпать мышь, используйте пару прямых ножниц, чтобы отрезать голову и разрезать ее вдоль sagittal средней линии, начиная с внутрипариетальной кости ростральной к носу. Поместите каждую половину разделенной головы в чистую чашку Петри и используйте острые ножницы, чтобы отрезать челюсть и язык. Освободите зрительный нерв, отрезав его от мозга до расположения оптического чиазма. И удалить все ткани мозга, включая обонятельную лампу, которая крепится к стене черепа. Теперь все остальные ткани должны иметь все черепа и орбитальные кости, связанные с глазным яблоком. Вымойте оставшиеся части с PBS, чтобы очистить от любой крови и волос мусора. Предварительно исправить ткани, поместив их в 50 миллилитров трубки, содержащей 4%paraformaldehyde и вращая их при комнатной температуре. После того, как приставка завершена, быстро мыть вскрытую голову в PBS три раза, чтобы еще больше устранить сломанные волосы и фиксаторы. Поместите ткань в 10-сантиметровую чашку Петри и разрежьте череп на три части вдоль плоскостей, указанных на рисунке одного из текстового протокола. Глазное яблоко и розетка скрыты в средней части черепа под этмоидными, лобными и челюстно-челюстными костями. Используйте две пары прямых типсов номер четыре, чтобы снять этмоидную кость и полностью разоблачить лобные и челюстные кости. Затем географически разделите поверхность черепа на четыре области. Вставьте кончик изогнутых типсов горизонтально в каждую область, чтобы удалить челюстно-лобные кости последовательно. После этого будут выставлены лежащие в основе лакримальные и джугальовые кости. Удалите две кости и связанные с ними подкожные мышцы и жиры, окружающие глазное яблоко. Обрезать глазное яблоко с прикрепленными веками и кожей в небольшой, квадратной формы блока для уменьшения объема тканей и облегчения ориентации ткани при встраивании. Поместите глазное яблоко и связанные с ним ткани обратно в 4%paraformaldehyde и продолжать чинить на ночь в 4