Доклиническая крысиная модель для изучения ишемии-реперфузионной травмы в реконструктивной микрохирургии

Здесь мы описываем доклиническую модель животного для изучения патофизиологии ишемии-реперфузионной травмы в реконструктивной микрохирургии. Эта бесплатная модель лоскут кожи на основе поверхностных каудальных эпигастральных сосудов в крысы может также позволить для оценки различных методов лечения и соединений противодействовать ишемии реперфузии травмы, связанные с повреждением.

Ишемия-реперфузия травмы является основной причиной отказа лоскута в реконструктивной микрохирургии. Это видео описывает доклиническую модель животных для изучения этой патофизиологии. Эта бесплатная модель лоскут кожи на основе поверхностных каудальных эпигастрических сосудов в крысы может позволить оценку различных методов лечения и соединений для противодействия ишемии-реперфузии травмы, связанные с повреждениями.

Микрохирургические реконструкции идеально подходят для широкого спектра дефектов. Однако эти процедуры обеспечивают обязательный период ишемии с последующим перепроверием. Этот период, как правило, хорошо переносится, и уровень успеха микрохирургических процедур превышает 90%,Однако, только 73,7% закрылков, требующих хирургического пересмотра может быть полностью безопасным.

Кроме того, в случаях пересадки травм авульсии пальцев, показатель успеха составляет около 60%, а в случаях повторной трансплантации композитных тканей, страдающих ишемией-реперфузии травмы прогноз проценты увеличивается, так как травма активизирует врожденный иммунитет. Поэтому изучение этого патофизиологического явления представляет интерес. Чтобы начать эту процедуру, используйте хирургический маркер, чтобы нарисовать три сантиметра на шесть сантиметров лоскут, убедившись, что одна из шести сантиметров сторон соответствует средней линии живота.

Затем сделайте шестисимметровый разрез кожи в средней линии живота, два перпендикулярных трехметровых разреза, а также один из шести сантиметров параллельно первому разрезу. Чтобы начать рассечение назначенного лоскута кожи, используйте ножницы и типсы Adson, чтобы поднять лоскут. Аккуратно вытяните лоскут из черепной области в сторону хвостовой области.

Вскрыть лоскут pedicle, не касаясь его или схвязая adventitia как можно меньше, чтобы избежать повреждения стенки судна. Используйте 8-0 нейлоновые швы для окклюдии лигатуры сафенозных сосудов, боковой окружности бедренной сосудов, и проксимальных каудальных бедренной сосудов. Зажим сосудистой pedicle, а затем сократить его, чтобы начать восемь часов ишемии периода.

Используйте гепаринизированный солевой раствор, чтобы пронизать лоскут, а затем удалить застойную кровь из микроциркуляции. Используйте 10-0 нейлоновых швов для выполнения микрохирургических анастомосов. После восьми часов ишемии, повторно использовать лоскут, удалив микрососудистые зажимы, и проверить сосудистой проходимости.

Во-первых, оценить кровоток с помощью транзитного ультразвукового течетметра и микрохирургических зондов. Поместите целевой сосуд в ультразвуковое зондирование окна зонда потока для количественной оценки объема потока. Когда будет достигнута хорошая связь и судно будет помещено в акустическое окно без напряжения, нажмите на кнопку записи на дисплее для хранения данных.

После этого используйте 4-0 абсорбируемых швов, чтобы закрыть кожу. Для оценки микроциркуляции клапана используйте лазерный анализ контрастности пятнышек. Сделайте новую запись для каждого образца и для каждого последующего исследования, нажав на файл, новую запись.

Откроется новое окно, которое отображает панель установки. Здесь отредактировать информацию для названия проекта, субъекта, оператора и имени записи. Отрегулируйте рабочее расстояние, перемещая лазер по отношению к ткани.

Увеличьте лазерную головку в или вне к ткани интереса. При настройке изображения стандартизируйте область измерения, введя нужную ширину и высоту. Установите плотность точки до максимума.

При настройке захвата изображения выберите частоту кадров и продолжительность записи. Затем нажмите кнопку записи, чтобы начать запись. Панель установки заменяется панелью записи, и данные сохраняются автоматически.

Сделай снимки во время процедуры, чтобы обеспечить дальнейшее сравнение. После этого используйте программное обеспечение ImageJ для измерения выживаемости и некроза, сначала поместив линейку на место клапана и сфотозировав контрольные снимки для макроскопических измерений. В наборе инструментов ImageJ выберите прямую линию и нарисуйте линию на один сантиметр линейки.

Нажмите на анализ, установить шкалу, и в текстовом ящике для известного расстояния, введите значение одного сантиметра. Нажмите на инструмент выбора полигонов и нарисуйте линии полигона над клапаном, чтобы вычислить жизнеспособную область. Нажмите на анализ, измерьте, чтобы получить значение области.

Затем поместите послеоперационную повязку на животное перед жилищем, чтобы предотвратить нанесение себе увечий. Через семь дней после операции, сфотографировать хирургическую область, чтобы макроскопические измерения выживаемости лоскута и некроза областях. Используя ранее описанный метод анализа контрастности лазерных пятен, визуализирует и количественно оценивает различия в перфузии для оценки микроциркуляции клапана.

После макроскопического анализа, удалить 4-0 швов, поднять лоскут, и использовать транзитное время ультразвука для переоценки сосудистого потока крови pedicle. Выполните отбор проб тканей путем продольного деления лоскута на две части, которые измеряют 1,5 сантиметра на шесть сантиметров. Сразу же после создания микрохирургических анастомосов мы получили более высокие значения кровотока, чем минимальные потоки, рекомендованные в литературе.

Таким образом, все микрохирургические анастомы были запатентованы через неделю после операции. Наблюдение за микроциркуляторным развратом кровотока во время ишемического оскорбления стало возможным с помощью лазерной техники контрастного анализа пятнышек. Это включает в себя немедленную гиперперфузию во время реперфузии лоскута и периоперационной, различные области с меньшим количеством перфузии имели более высокий риск послеоперационного некроза лоскута, которые действительно были некротизированы через семь дней после окончания исследования.

Область выживания лоскута после восьми часов ишемии и ее последующей реперфузии составила около 40% Ранее опубликованные результаты показывают статистически значимые различия, когда эта модель сравнивается с закрылками, где не наносится ишемическое оскорбление. Не забудьте вскрыть лоскут pedicle, не касаясь его или схвязая adventitia как можно меньше, чтобы избежать повреждения стенки сосуда, а также выполнять надлежащие микрохирургические анастомы, чтобы избежать осложнений из-за хирургической техники. Интраоперационная технология УЗИ транзитного времени позволяет количественно оценить кровоток микрохирургических анастомозов и тем самым предсказать перфузию клапана.

Послеоперационный, лазерный анализ контрастности пятнышка позволяет полу-непрерывности в режиме реального времени отображение потока в свободных закрылков. Это перспективный метод, однако необходимы дальнейшие исследования. В этом видео описан протокол подходящей модели оценки терапевтических средств для противодействия ишемии-реперфузии травмы в области реконструктивной микрохирургии.