Идентификация регуляторов транскрипционных факторов с использованием средне-пролимчатого скрининга архиерейных библиотек и репортера на основе двойной люциферазы

Этот протокол может быть использован для проверки массивных лентивирусных или ретровирусных библиотек анализа для выявления новых регуляторов транскрипционных факторов в раковых клетках. Основными преимуществами этой техники является то, что она является быстрой, средней пропускной способностью и недорогой, и что она использует оборудование и реагенты, широко доступные для большинства исследователей. Чтобы расширить и очистить каждый лентивирусный вектор в библиотеке, сначала добавьте 1,3 миллилитров бульона Luria, дополненного 100 микрограммами на миллилитр ампициллина в каждую колодец 96-ну глубокой пластины.

Прививать каждую колодец двумя микролитерами глицеролов для ночной инкубации при 37 градусах По Цельсию и 225 оборотов в минуту. На следующий день, передача каждой культуры бактерий в отдельных 1,5 миллилитров микроцентрифуг трубки для центрифугации. Очистить каждый вектор соответствующим набором бактериального минипрепа в соответствии с инструкциями производителя.