Регулируемая система визуализации высокой четкости для поведенческих исследований взрослых дрозофил

Из-за своих неуклюжих размеров дрозофилу трудно изобразить. Этот метод демонстрирует визуализацию поведения и морфологии мух с помощью стереомикроскопа. Этот протокол может быть использован как для научных исследований, так и для обучения.

Демонстрация процедуры будет Ms.Li Тун и г-жа Вэн Юйцзя, студенты, которые проводят исследовательскую подготовку под моим руководством. Для начала сделайте камеру наблюдения за поведением мухи, или FBOC, используя полупрозрачную пластиковую крышку бутылки размером около 17 на 22 миллиметра или разрезав участок в 17 миллиметров от толстого конца пятимиллилитрового наконечника пипетки. Налейте 1% агара в FBOC, чтобы отрегулировать его глубину.

Если пищу нужно поместить в FBOC, влейте агар для получения глубины 12 миллиметров. Если пищу не нужно помещать в FBOC, налейте агар на глубину пяти миллиметров, чтобы легче отслеживать местонахождение плодовых мушек. Если для изготовления FBOC используется наконечник пипетки, поместите отрезной наконечник пипетки в 35-миллиметровую или 60-миллиметровую чашку Петри.

Налейте 1%-агаровый гель в чашку Петри толщиной около пяти миллиметров и подождите, пока агар затвердеет и запечатывает дно FBOC. Затем влейте агаровой гель в FBOC до нужной толщины. Сделайте основание FBOC, раскулив отверстие глубиной 10 миллиметров в центре куска листа этиламиновой пены с тем же диаметром, что и FBOC.

Вставьте FBOC в отверстие. При необходимости делайте пищу для мух с дрожжевой средой, искусственной диетой или чистой сахарозой или глюкозой, в зависимости от цели наблюдения. Чтобы визуально определить, кормятся ли мухи, добавьте в пищу пищевые красители до конечной концентрации 12,5 миллиграммов на 100 миллилитров.

Налейте приготовленную пищу в чашку Петри на высоту до восьми миллиметров. После затвердевания поместите пищу на прямоугольную, нарисованную на бумаге, и соответственно вырежьте пищу, поместите ее на кусок пластика и разрежьте в четырехугольную пирамиду или четырехугольную пирамиду фрустума, чтобы можно было записывать поведение мух под разными углами, когда мухи приземляются на пищу. Вырежьте кусок пластика и используйте пинцет, чтобы поместить пластик и пищу в центр FBOC.

В чистый пустой флакон толщиной 1%-2 сантиметра налить 1%-агаровый гель и поместить его при комнатной температуре на 1-2 часа. Переложите мухи на бутылку и поместите ее при 25 градусах Цельсия на 36 часов и более. Охладите и инактивируйте мух в измельченном льду, отсортируйте их на пакете со льдом и перенесите их в FBOC, как описано ранее.

После передачи мух в FBOC накройте его 30-40 миллиметрами УФ или прозрачным фильтром для камеры, чтобы сформировать комплекс FBOC. Поместите комплекс FBOC под стереомикроскоп для наблюдения. Осветить FBOC.

Установите мини-светодиодные видеофоны для вспышки горячих подставок для обуви и разместите огни на левой и правой сторонах FBOC. Включите свет и установите цветовую температуру от 5 000 до 5 600 Кельвинов, а яркость до 100% Включите светодиодные видеосветы и отрегулируйте стереозум-микроскоп до тех пор, пока край FBOC не будет четко виден невооруженным глазом. Переместите FBOC в центр поля зрения.

Прикрепите зажим адаптера цифровой камеры универсального телескопа к окуляру стереомикроскопа. Затем надежно прикрепите компактную цифровую камеру к адаптеру, поочередно поворачивая крепежный винт камеры и винт для крепления камеры. Включите цифровую камеру и поверните горизонтальные/вертикальные ручки тонкой настройки до тех пор, пока край FBOC четко не появится в центре яркого круглого поля зрения на ЖК-экране камеры.

Поверните диск режима в автоматический режим приоритета диафрагмы. Нажмите режим фокусировки на мультисекторе, выберите макро крупным планом и нажмите кнопку OK. Переместите переключатель масштабирования с широкоугольного конца на конец телеобъектива и увеличьте масштаб кругового изображения до тех пор, пока его центральная часть не заполнит весь ЖК-экран.

Нажмите кнопку записи фильма и начните запись поведения мухи. Поверните ручку фокусировки микроскопа до тех пор, пока мухи в FBOC не будут хорошо видны. Выберите интересующее поведение мухи для наблюдения или видеозаписи.

Поверните ручку масштабирования, чтобы увеличить и уменьшить масштаб, чтобы достичь желаемого увеличения для наблюдения или видеозаписи. Репрезентативная фотография, сделанная через УФ-фильтр, четкая и четкая, очень похожая на фотографию, сделанную, когда культуральный флакон не покрыт. Качество фотографии, сделанной через стекло чашки Петри, очень плохое и частично размытое.

Здесь показана фотография, взятая из видеозаписи, показывающая детали каждой части тела мухи. Поскольку камера подключена к зум-стереомикроскопу, очень легко снимать от панорамных до крупных решений с помощью системы зума. Используя этот протокол, поведение мухи можно наблюдать и документировать для нескольких углов обзора.

Например, самка мухи постоянно трет яйцекладу задними лапами в процессе откладки яиц. Эта деталь яйцекладуческого поведения не может быть четко видна со стороны. Используя этот простой и экономичный метод, мы можем сделать панорамный или крупный план поведения и морфологии мух и получить видео или фото хорошего качества.