Количественная оценка клеточных плотностей и антигенных свойств с использованием магнитной левитации

Этот метод позволяет разделять различные типы клеток и клетки, подвергающиеся различным процессам исключительно на основе плотности, практически без манипуляций за короткий промежуток времени. Основные преимущества данного метода заключаются в том, что он как малоинвазивный, требует небольших объемов, обеспечивает быстрый результат, не зависит от классических считывания, а специализированный персонал не требуется. Этот метод может быть применен для выявления множественных заболеваний, например анемии и сепсиса.

Для начала используют устройство для прокалывания одним щелчком мыши, чтобы уколоть палец резус-фактора положительного донора крови, и собрать 10 микролитров крови в одном миллилитрах DPBS. Добавьте один микролитр флуоресцентного красителя в один миллилитр суспензии положительных клеток резус-фактора для флуоресцентного окрашивания плазматической мембраны и инкубируют при 37 градусах Цельсия в течение 15 минут. Гранулируют ячейки, вращаясь при 5 600 G в течение 15 секунд и промывая гранулу три раза, используя один миллилитр DPBS.

Повторно суспендируют гранулу в одном миллилитрах HBSS с кальцием и магнием. Используйте устройство для прокалывания одним щелчком мыши, чтобы уколоть палец отрицательного донора крови с резус-фактором и собрать два микролитра крови. Чтобы подготовить экспериментальную трубку, содержащую только бусины, добавьте 174 микролитра HBSS с кальцием и магнием, один микролитр контрольных шариков IgG, один микролитр тяжелых бусин плотностью 1,2 грамма на миллилитр и 24 микролитра 500 миллимоляров гадолиния.

Для подготовки экспериментальной контрольной трубки, содержащей IgG, добавьте 172 микролитра HBSS с кальцием и магнием, один микролитр контрольных шариков IgG, один микролитр тяжелых шариков, один микролитр отрицательной крови с резус-фактором, один микролитр окрашенной положительной суспензии крови с резус-фактором и 24 микролитра 500 миллимоляров гадолиния. Для подготовки образца экспериментальной пробирки добавьте 172 микролитра HBSS с кальцием и магнием, один микролитр бусин с анти-RhD-покрытием, один микролитр тяжелых шариков, один микролитр отрицательной крови с резус-фактором, один микролитр окрашенной положительной суспензии крови с резус-фактором и 24 микролитра 500 миллимоляров гадолиния. Настройте устройство магнитной левитации.

И загрузите 50 микролитров образца в капиллярную трубку до тех пор, пока трубка не будет заполнена. Запечатайте концы капиллярной трубки капиллярным герметиком, гарантируя, что пузырьков не будет. Поместите капиллярную трубку в капиллярный держатель между верхним и нижним магнитами, отрегулируйте сцену и фокусировку для оптимального просмотра.

Подождите примерно от пяти до 20 минут, пока клетки и шарики осядет в их магнитном равновесии. Используя этот протокол, клетки крови были разделены в зависимости от высоты левитации с помощью магнитного устройства левитации. Бусины низкой и высокой плотности использовались для обеспечения высоты левитации плотности и ссылок на размер.

Полиморфноядерные клетки левитировали над эритроцитами при концентрации 21 миллимолярного иона гадолиния. Старые клетки крови левитировали при концентрации ионов гадолиния 60 миллимоляров. Эритроциты, полиморфноядерные клетки и лимфоциты были разделены при концентрации ионов гадолиния 40 миллимоляров на основе их внутренней плотности.

Антиген резус-фактора был обнаружен на красных кровяных клетках с использованием бусин, покрытых IgG и анти-RhD антителами. Комплексы эритроцитов бусин не были сгенерированы в контрольном образце IgG, но были обнаружены флуоресцентно окрашенные эритроциты, захваченные положительными шариками резус-фактора. Связывание анти-RhB с положительными клетками резус-фактора создало клеточный комплекс шариков в центре при прерывистой плотности несвязаных шариков и отрицательных эритроцитов.

Далее образование комплекса было подтверждено наблюдением за испускаемой флуоресценцией. Комплексы шариков B, образованные между бусинами высокой и низкой плотности, покрытыми антителами к CR1 и CD47, указывают на наличие внеклеточных везикул, полученных из эритроцитов. Укупорка капилляра без введения пузырьков является самым сложным шагом и требует практики.

Этот метод может дать представление о гематологии, особенно ориентированной на заболевания эритроцитов.